Cas9核酸酶是一种向导RNA（guide RNA, gRNA）引导的核酸内切酶，可催化双链DNA的裂解。NLS-Cas9-EGFP在Cas9核酸酶的基础上进行改造，它在N端包含一个核定位信号(NLS)，在C端包含一个EGFP和一个6X (His)序列。当Cas9以NLS序列表达时，Cas9 RNP复合物在进入细胞后立即定位到细胞核。不需要体内转录或翻译，提高了效率。此外，与其他系统相比，EGFP标签可作为追踪或分类转染细胞的报告器，通过荧光激活细胞分选(FACS)富集所需基因组编辑的细胞群。它大大降低了在基因组编辑应用中与单细胞克隆和基因分型相关的人工和成本。

 

产品特点如下：

无DNA：没有外部DNA添加；

高切割效率：NLS 确保 Cas9 蛋白高效进入细胞核 ；

低脱靶效应：Cas9 核酸酶的瞬时表达提高了切割的特异性；

节省时间：无需转录和翻译；

减少劳动力：通过基于EGFP的FACS富集细胞群以进行所需的基因组编辑。C端His标签增加了融合蛋白检测方法的选择。

可应用于：

通过体外DNA切割筛选高效和特异性靶向gRNA。

通过电穿孔或注射与特定 gRNA 结合时的体内基因编辑。

通过基于 EGFP 的 FACS 富集细胞群以进行所需的基因组编辑。

 

产品信息

 

货号	11364ES50 / 11364ES60 / 11364ES76
规格	50 μg / 100 μg / 500 μg
来源	重组Cas9来源于大肠杆菌
物种	化脓性链球菌
标签	EGFP，His
分子量	190 KDa
浓度	1 mg/mL（50 μg）；3 mg/mL（100 μg）；3 mg/mL（500 μg）
反应温度	37℃
溶剂	10 mM Tris，300 mM NaCl，0.1 mM EDTA，1 mM DTT，50%甘油，pH7.4

 

组分信息

 

组分编号	组分名称	11364ES50	11364ES60	11364ES76
11364-A	NLS-Cas9-EGFP Nuclease	50 μg（1 mg/mL）	100 μg（3 mg/mL）	500 μg（3 mg/mL）
11364-B	10X Reaction Buffer	1.5 mL	1.5 mL	1.5 mL

注：10X Reaction Buffer 配方：200 mM HEPES, 1 M NaCl, 50 mM MgCl₂, 1 mM EDTA, pH 6.5 at 25°C

 

储存条件

 

-25~-15℃保存，有效期1年。

 

使用说明

 

体外DNA裂解实验推荐反应体系

组分	20 μL反应体系
10×Reaction Buffer	2 μL
Substrate DNA	2 μL（80 ng/μL）
NLS-Cas9-EGFP Nuclease	2 μL-4 μL（25 ng/μL）
sgRNA	2 μL（50 ng/μL）
Nuclease-free water	To 20 μL

注意：

1. 溶液应充分混合，在37℃孵育1-2 h，然后加入1 μL的蛋白酶K（20 μg/μL），在55℃孵30 min孵育结束后，用琼脂糖凝胶电泳检测消化效率。
2. 此反应条件仅为推荐量，Cas9 : sgRNA的比例，一般建议1:2-1:5之间进行摸索。
3. 设计3-6条sgRNA，筛选效率最高的sgRNA。

 

注意事项

 

1. 本产品仅作科研用途。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

Ver.CN20230320