探针法荧光定量有多种类型,例如TaqMan探针法、双杂交探针法、分子信标探针法和蝎形探针法等。其中TaqMan探针是最常见的探针方法,TaqMan探针法的出现解决了染料法非特异性的问题。广泛应用特定基因表达分析、DNA定量、SNPs基因分析、基因突变检测、产前遗传病检测、传染病早期病原体检测等领域。
TaqMan探针是一条与目的序列互补的寡核苷酸,5'端标记荧光报告基团(Reporter, R),3'端标记淬灭基团(Quencher, Q)。完整探针中R与Q距离极近,荧光被淬灭;在PCR延伸阶段,Taq酶的5'→3'外切酶活性将探针水解,R与Q分离,释放荧光信号。
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特点 |
说明 |
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优点 |
特异性极高(需要引物+探针同时结合),可多重检测 |
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局限 |
成本较高,需要针对每个靶标设计探针 |
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典型应用 |
病原检测、SNP分型、甲基化分析、多重定量 |
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