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精品推荐 | 高效sgRNA合成试剂盒,加速基因编辑研究进程

 

CRISPR技术自2012年问世至今,凭借其卓越的性能,迅速在基因编辑领域崭露头角,成为了最先进的基因编辑工具。这一技术的诞生,为基因功能研究、药物靶点筛选、遗传疾病治疗、癌症研究以及作物育种等多个领域带来了突破性的进展。因其显著的成果,科学家Emmanuelle Charpentier和Jennifer A. Doudna荣获了2020年诺贝尔化学奖。

 

图1. 2020年诺贝尔化学奖得主[1]

 

CRISPR/Cas系统的核心依赖于两个主要组件:一是具有核酸切割能力的Cas蛋白;二是特异性指导Cas蛋白精确剪切的向导RNA(gRNA)。因此,在基因编辑过程中,除了选择合适的高效Cas蛋白外,精心构建高效且具有针对性的sgRNA同样至关重要。gRNA由一个tracrRNA和至少一个crRNA组合构成,Emmanuelle Charpentier和Jennifer A. Doudna通过将tracrRNA和crRNA融合成一条单链——单链向导RNA(sgRNA),极大地简化了sgRNA的生成和应用步骤。通常所说的sgRNA设计实际上是指对其中的crRNA组成部分进行精确设计,以便挑选出最适合的sgRNA。

 

图2. sgRNA示意图(以Cas9为例)

 

 

 

sgRNA的合成方式

 

sgRNA的合成方法主要分为体外转录(IVT)和化学合成两种,其中,由于IVT方法具备操作灵活、成本效益高以及产出量大等优势,在实验室环境中被广泛采用。

经过精心的设计与开发,翌圣生物推出了专门针对Cas9蛋白的sgRNA体外转录合成试剂盒——Hifair® Precision sgRNA Synthesis Kit(11355ES)。该试剂盒的应用极为简便,用户只需设计一条特定的上游引物,并结合试剂盒提供的其他试剂,即可在短短4h内合成20-100 μg高品质的sgRNA。所产生的sgRNA具备高产量、高纯度和高活性等优势,在基因编辑过程中能显著提升编辑效率,并大幅降低脱靶现象的发生几率,确保基因编辑工作以高效率和高准确性进行。

 

 

 

翌圣sgRNA合成试剂盒性能展示

 
01

高合成产量

 

单管反应4h,sgRNA产量可达20-100 μg

sgRNA的浓度关系到CRISPR/Cas9系统的编辑效果成败,只有加入高浓度的sgRNA方能对基因的编辑起较好效果。翌圣的Hifair® Precision sgRNA Synthesis Kit可在单管反应4h内获得20-100 μg的sgRNA,足以满足基因编辑的需要。

 

图3. 不同时间的sgRNA的合成量

02

适用范围广

 

不同种类的sgRNA均可获得高产量

一个优质的sgRNA Synthesis Kit不仅应具备高产量sgRNA的合成能力,还应兼容各种类型的sgRNA合成,以满足不同基因编辑的需求,从而拓宽产品的应用范围。使用翌圣生物的Hifair® Precision sgRNA Synthesis Kit同时合成10种不同序列的sgRNA,实验结果表明,该试剂盒能够高效合成不同序列的sgRNA,在使用过程中无需考虑序列差异的影响。

 

图4. 不同序列的sgRNA的合成产量

 

03

高纯度

 

合成的sgRNA条带单一

除了sgRNA的产量,合成的sgRNA的纯度也是影响CRISPR/Cas9系统的编辑的效果的关键因素之一。如果合成的sgRNA的纯度差,易出现脱靶效应。翌圣Hifair® Precision sgRNA Synthesis Kit合成的sgRNA经过安捷伦2100测定,其条带明显且无杂带,说明sgRNA纯度高。

 

图5. 合成的sgRNA的纯度(安捷伦2100测定)

 

04

高活性

 

合成的sgRNA可有效引导Cas9切割靶标DNA

使用翌圣Hifair® Precision sgRNA Synthesis Kit合成的sgRNA与Cas9组合用于体外切割靶DNA,经琼脂糖凝胶电泳检测发现所合成的sgRNA可以有效引导Cas9在特定位点切割并产生特定大小的DNA片段。

 

图6. sgRNA的剪切效率效果图

 

翌圣生物一直深耕基因编辑领域,并推出了一系列高品质的原料,旨在为基因编辑技术的发展和进步提供支持。除了Hifair® Precision sgRNA Synthesis Kit外,翌圣生物可提供基因编辑相关蛋白,如Cas9、Cas12a和Cas12b等相关产品。

 

 

 

基因编辑相关产品

 

产品分类

产品名称

产品货号

sgRNA合成

Hifair® Precision sgRNA Synthesis Kit

11355ES

Cas蛋白

Cas9 Nuclease

14701ES

ArCas12a Nuclease (10 μM)

14702ES

AapCas12b Nuclease (10 μM)

14808ES

sgRNA纯化

Hieff NGS® RNA Cleaner

12602ES

 

 

400-6111-883