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qPCR通过在PCR体系中加入荧光报告分子,在扩增过程中实时采集荧光信号。荧光强度与PCR产物量成正比,系统以循环数(Cycle Number)为横坐标、荧光信号为纵坐标绘制扩增曲线。通过Ct值(Cycle Threshold)——荧光信号越过设定阈值的循环数——来反推初始模板量。

Ct值与起始模板浓度成反比:模板越多,Ct值越小;模板越少,Ct值越大。这种对数线性关系是qPCR定量的数学基础。

qPCR核心应用场景

应用场景

推荐技术路线

关键需求

基因表达差异分析

SYBR Green 染料法

高灵敏度、宽线性范围

病原微生物检测

TaqMan 探针法

高特异性、防污染、多重检测

miRNA定量

miRNA专用SYBR/探针法

短片段高灵敏度

SNP基因分型

TaqMan SNP/TaqMan ARMS

单碱基分辨能力

甲基化检测

亚硫酸盐转化+TaqMan/染料法

耐尿嘧啶模板

细胞直扩表达分析

Cell Direct一步法

免RNA提取、快速

高通量筛选

一步法RT-qPCR

96/384孔板兼容性

冻干试剂开发

冻干型qPCR Mix

常温稳定、无甘油酶

产品选购指南

荧光定量PCR选购指南

RT-qPCR试剂选购指南

内参基因选购指南

产品应用解决方案

荧光定量操作解析

qPCR引物设计原则

荧光定量PCR扩增效率

qPCR数据分析

qPCR常见问题

qPCR仪器设置

RT-qPCR冻干原料

miRNA检测

低丰度目的基因表达

dNTP

影响cDNA浓度因素

TaqMan qPCR

RNA降解对qPCR实验的影响

qPCR实验Ct值的合理范围

复孔平台期荧光信号的影响

RT-qPCR注意事项

RNA病毒研究

低浓度模板扩增

单拷贝扩增

qPCR数据处理

荧光定量最美曲线小课堂

1:1提取高品质RNA

评估RNA质量

逆转录酶

如何正确选择逆转录引物 cDNA注意事项

如何做好扩增片段和引物设计

如何获取高质量的cDNA模板

全面认识荧光定量PCR相关图表

问题图表分析及实验案例 如何分析荧光定量数据

qPCR文章金标准-MIQE

不同荧光定量PCR方法

荧光定量最终章:认真的态度&科学的精神

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