NLS-Cas9-BPNLS Nuclease可以与引导RNA（guide RNA，gRNA）一起形成核糖核苷酸（RNP）复合物。使用RNP复合物进行基因编辑已被证明可以减少其他CRISPR基因编辑技术所遇到的问题，如病毒和质粒传递，脱靶效应、细胞活力和转录/翻译等。

NLS-Cas9-BPNLS Nuclease是一种无标签核酸酶，携带编码化脓性链球菌Cas9基因的质粒，N端双粒子核定位信号（BPNLS），C端核蛋白核定位信号（核蛋白NLS），BPNLS和核浆蛋白NLS能够显著提高基因编辑效率。

 

该产品具有以下特点：

编辑效率高：在体外和体内始终如一的高编辑效率。

无标签：不含额外的标记氨基酸。

无脱氧核酸：无外部 DNA添加到系统中。

 

产品信息

货号	11363ES50 / 11363ES60 / 11363ES76
规格	50 μg / 100 μg / 500 μg
来源	重组Cas9来源于大肠杆菌
物种	化脓性链球菌
标签	无标签
分子量	160 KDa
浓度	4 mg/mL
反应温度	37℃
溶剂	25 mM Tris、300 mM NaCl、0.1 mM EDTA， 50% 甘油， pH 8.0

 

组分信息

组分名称	11363S50	11363S60	11363ES76
NLS-Cas9-BPNLS Nuclease	50 μg（4 mg/mL）	100 μg（4 mg/mL）	500 μg（4 mg/mL）

 

储存条件

-25~-15℃保存，有效期1年。

 

使用说明

体外DNA裂解实验推荐反应体系

组分	20 μL反应体系
10×Reaction Buffer	2 μL
Substrate DNA	2 μL（80 ng/μL）
NLS-Cas9-BPNLS Nuclease	2-4 μL（25 ng/μL）
sgRNA	2 μL（50 ng/μL）
Nuclease-free water	To 20 μL

注意：

1) 溶液应充分混合，在37℃孵育1-2 h，然后加入1 μL的蛋白酶K（20 μg /μL），在55℃孵30 min孵育结束后，用琼脂糖凝胶电泳检测消化效率。

2) 此反应条件仅为推荐量，Cas9 : sgRNA的比例，一般建议1:2-1:5之间进行摸索。

3) 设计3-6条sgRNA，筛选效率最高的sgRNA。

切割效率检测示意图：

按上表所述，20 μL的反应体系，在含有线性化质粒、gRNA 和Cas9的1×Cas9核酸酶反应缓冲液中在37°C下反应1小时，在琼脂糖凝胶电泳测定结果显示，线性化质粒的消化效率为98.28%，远高于90%。

 

注意事项

1. 本产品仅作科研用途。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

Ver.CN20230321