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产品简介
PBCV DNA Ligase，亦称为SplintR连接酶、PBCV-1 DNA Ligase或Chorella病毒DNA连接酶，是一种ATP依赖的DNA连接酶，能够高效催化与一条互补的RNA单链配对的两条相邻DNA单链的连接反应。这两条相邻的DNA链中，提供3'羟基的被称之为受体DNA链(Acceptor DNA)，提供5'磷酸的被称之为供体DNA链(Donor DNA)，在这个连接过程中需要一条互补的RNA链对两条DNA单链起“夹板”或“支架”的作用。PBCV DNA ligase的连接酶活性远优于传统的 T4 DNA 连接酶，对以 RNA 为夹板的 DNA 底物（表观 Km = 1 nM，Km值越小表示亲和力越强）表现出亲和力，能够对复杂混合物中独特的 RNA 种类进行亚纳摩尔级检测，使其应用到高灵敏RNA 检测技术，非常适合用于许多二代测序和分子诊断等应用中的靶标富集流程。
产品信息
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货号 |
14962ES80 / 14962ES90 |
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规格 |
1,250 U / 5,000 U |
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来源 |
E.coli 表达的来源于Chorella virus的 PBCV-1 DNA Ligase基因 |
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分子量 |
34 KD |
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酶活定义 |
一个单位定义为在25℃，15 min内，于1X PBCV Ligase buffer中，将2 pmol的FAM标记的DNA:RNA杂合底物连接所需的酶量（至少达到50%的完成度） |
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酶保存液 |
10 mM Tris-HCl , 300 mM NaCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 50% (v/v) Glycerol pH 7.4 @ 25℃ |
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反应条件 |
50 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2, 1 mM ATP, 10 mM DTT, pH7.5 @25℃ |
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浓度 |
25 U/µL |
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纯度 |
>95% （SDS PAGE） |
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失活条件 |
65℃，20 min |
组分信息
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组分编号 |
组分名称 |
14962ES80 |
14962ES90 |
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14962-A |
PBCV DNA ligase (25 U/µL) |
50 µL |
200 µL |
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14962-B |
10 x PBCV Ligase buffer |
1 mL |
1 mL |
产品应用
1.基于探针法的microRNA等小RNA的检测；
2.通过互补RNA序列进行“夹板”固定的单链DNA的连接；
3.使用DNA探针进行连接达到检测特定RNA的目的;
4.SNP或可变剪接的检测；
5.RASL-seq分析。
储存条件
-25~-15℃保存，有效期2年。
使用说明
推荐配置应用反应与体系：
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组分 |
体积 |
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10 x PBCV Ligase buffer |
2 µL |
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底物（Substrate）(1 µM) |
2 µL |
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PBCV DNA ligase (25 U/µL) |
1 µL |
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H2O |
15 µL |
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Total |
20 µL |
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25°C反应15-60 min ； 65°C失活20 min |
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注意事项
1.本品在ATP浓度（10 µM - 1 mM）和pH（6.5 - 9）范围内都具有活性。在 Mg2+ > 5 mM，pH 值位于 7.5 至 8.0 的条件下，可观察到最佳活性。较高温度（高达37℃）和补充5 mM Mn2+ 可以增强该酶活性。盐浓度超过100 mM会抑制反应。
2.为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
3.本产品仅作科研用途。
Ver.CN20240513
