PBCV DNA Ligase，亦称为SplintR连接酶、PBCV-1 DNA Ligase或Chorella病毒DNA连接酶，是一种ATP依赖的DNA连接酶，能够高效催化与一条互补的RNA单链配对的两条相邻DNA单链的连接反应。这两条相邻的DNA链中，提供3'羟基的被称之为受体DNA链(Acceptor DNA)，提供5'磷酸的被称之为供体DNA链(Donor DNA)，在这个连接过程中需要一条互补的RNA链对两条DNA单链起“夹板”或“支架”的作用。PBCV DNA ligase的连接酶活性远优于传统的 T4 DNA 连接酶，对以 RNA 为夹板的 DNA 底物（表观 Km = 1 nM，Km值越小表示亲和力越强）表现出亲和力，能够对复杂混合物中独特的 RNA 种类进行亚纳摩尔级检测，使其应用到高灵敏RNA 检测技术，非常适合用于许多二代测序和分子诊断等应用中的靶标富集流程。
主要应用：
- 原位测序：使用PBCV DNA Ligase（图示SplintR连接酶）将挂锁探针连接成环状，形成RCA模板，在Phi29聚合酶的作用下进行原位滚环扩增；
- 连接单链DNA。
- 无核酸外切酶、内切酶、RNase、磷酸酶残留；
- 蛋白纯度＞95%。
- 连接效率高
在25℃条件下，分别添加0.5 U、10 U和25 U剂量的翌圣（Yeasen）与供应商A*的PBCV DNA ligase（货号#14962ES），反应60分钟以连接底物。琼脂糖凝胶电泳结果显示，翌圣PBCV DNA ligase与供应商A*的底物连接效果一致。
图1. PBCV DNA ligase连接效果验证
- 无核酸外切酶、内切酶、RNase、磷酸酶残留
将3个批次的翌圣PBCV DNA Ligase (Cat#14962ES)与底物DNA在37℃孵育4 h（125 U 投入量），以及与底物RNA在37℃孵育16 h（25 U 投入量）。琼脂糖凝胶电泳检测结果表明，翌圣PBCV DNA Ligase无核酸外切酶、切口酶、RNase残留。同时，利用磷酸酶检测盒对3个批次的PBCV DNA Ligase进行检测，4 h反应后，酶活(µmol/min)数据显示翌圣PBCV DNA Ligase磷酸酶残留极低（<0.0001）。
图2. 核酸外切酶、内切酶、RNase、磷酸酶残留检测
-25~-15℃保存，有效期2年。
