产品描述
Hieff® Quick T4 DNA Ligase是一款可用于NGS建库过程中DNA片段和接头连接的单酶产品,该产品已经过高通量测序验证,质量优异。对于无需进行体系调整的客户,推荐选购Hieff NGS® Fast-Pace DNA Ligation Module(Cat#12607)。
产品组分
组分编号 |
组分名称 |
规格 |
10301-A |
Hieff® Quick T4 DNA Ligase (400 U/µL) |
100 µL |
10301-B |
10 × T4 DNA Ligase Buffer |
250 µL |
运输和保存方法
冰袋运输,-20℃保存,有效期2年。
单位定义
在20 μL的连接反应体系中,6 μg的λDNA-Hind Ⅲ分解物在16℃下反应30 min时,催化50%以上的DNA片段发生连接所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。
注意事项
1)Buffer在融解时,如果出现少量沉淀属正常现象,请颠倒混匀后使用。
2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
3)本产品仅作科研用途!
使用方法
1.目前主流的合并法DNA建库试剂盒,其末端修复和加A处理后一般不纯化,直接进行接头连接。本试剂盒可与主流的商业化末端修复加A体系兼容,进行接头连接。反应体系请参考如下配制,涡旋瞬离后置于20℃,反应15 min即可。
表1. Adapter Ligation体系
名称 |
体积(μL) |
dA-tailed DNA |
60 |
10 × T4 DNA Ligase Buffer |
10 |
50% PEG6000 |
10* |
DNA Adapter |
X** |
Hieff® Quick T4 DNA Ligase |
1-5*** |
ddH2O |
To 100 |
【注】:*试剂盒内未提供50% PEG6000,需自行准备。
**接头用量参考表2。
***Hieff® Quick T4 DNA Ligase用量可根据需要添加1-5 μL。
2. Adapter的质量和使用浓度直接影响连接效率及文库产量。Adapter用量过高可能会产生较多Adapter Dimer,用量较低可能会影响连接效率及文库产量。表2列举了使用本试剂盒,不同Input DNA量推荐的Adapter使用量。
表2. 500 pg-1 μg Input DNA推荐的Adapter使用浓度
Input DNA |
Adapter : Input DNA摩尔比 |
Input DNA |
Adapter : Input DNA摩尔比 |
1 μg |
10:1 |
50 ng |
100:1 |
500 ng |
20:1 |
25 ng |
200:1 |
250 ng |
40:1 |
1 ng |
200:1 |
100 ng |
100:1 |
500 pg |
400:1 |
【注】:Input DNA摩尔数(pmol)≈ Input DNA质量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均长度(bp)]。
【接头添加计算举例】:当Input DNA为100 ng,Input DNA长度为300 bp时,接头应该添加多少?
第一步,计算Input DNA摩尔数。公式:Input DNA摩尔数(pmol)≈ Input DNA质量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均长度(bp)];
Input DNA摩尔数(pmol)=100 ÷(0.66×300)=0.5 pmol;
第二步,计算接头添加摩尔数。根据表2查询接头添加比例;
根据表2,查得Input DNA 100ng时接头添加比例100:1,则接头添加摩尔数=100×0.5 pmol=50 pmol;
第三步,计算接头添加体积。接头浓度=15 μmol/L(如使用其他接头,浓度需要依据其他接头浓度参数);
接头添加体积=接头添加摩尔数(50 pmol)÷接头浓度(15 μmol/L)=3.34 μL(注:15 μmol/L=15 pmol/μL)
综上,接头可添加3.4 μL。(注:接头最大加入体积不超过5 μL)
相关产品
产品名称 |
货号 |
规格 |
12200ES08/24/96 |
8/24/96 T |
|
12608ES24/96 |
24/96 T |
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12607ES08/24/96 |
8/24/96 T |
|
12615ES04/16 |
12×4/12×16 T |
|
12616ES04/16 |
12×4/12×16 T |
|
12617ES04/16 |
12×4/12×16 T |
|
12618ES04/16 |
12×4/12×16 T |
|
2×Super Canace® Ⅱ High-Fidelity Mix for Library Amplification |
12621ES24/96 |
24/96 T |
Hieff NGS® DNA selection Beads(Superior Ampure XP alternative) |
12601ES08/56 |
5/60 mL |
12640ES60/76 |
100/500 T |
HB210722