Hieff® Quick T4 DNA Ligase

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产品描述
Hieff® Quick T4 DNA Ligase是一款可用于NGS建库过程中DNA片段和接头连接的单酶产品,该产品已经过高通量测序验证,质量优异。对于无需进行体系调整的客户,推荐选购Hieff NGS® Fast-Pace DNA Ligation Module(Cat#12607)。


产品组分

组分编号

组分名称

规格

10301-A

Hieff® Quick T4 DNA Ligase (400 U/µL)

100 µL

10301-B

10 × T4 DNA Ligase Buffer

250 µL


运输和保存方法
冰袋运输,-20℃保存,有效期2年。


单位定义
20 μL的连接反应体系中,6 μg的λDNA-Hind Ⅲ分解物在16℃下反应30 min时,催化50%以上的DNA片段发生连接所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。


注意事项
1)Buffer在融解时,如果出现少量沉淀属正常现象,请颠倒混匀后使用。

2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 

3)本产品仅作科研用途!

 

使用方法

1.目前主流的合并法DNA建库试剂盒,其末端修复和加A处理后一般不纯化,直接进行接头连接。本试剂盒可与主流的商业化末端修复加A体系兼容,进行接头连接。反应体系请参考如下配制,涡旋瞬离后置于20℃,反应15 min即可。
表1.  Adapter Ligation体系

名称

体积(μL)

dA-tailed DNA

60

10 × T4 DNA Ligase Buffer

10

50% PEG6000

10*

DNA Adapter

X**

Hieff® Quick T4 DNA Ligase

1-5***

ddH2O

To 100


【注】:*试剂盒内未提供50% PEG6000,需自行准备。
**接头用量参考表2。
***Hieff® Quick T4 DNA Ligase用量可根据需要添加1-5 μL。

2. Adapter的质量和使用浓度直接影响连接效率及文库产量。Adapter用量过高可能会产生较多Adapter Dimer,用量较低可能会影响连接效率及文库产量。表2列举了使用本试剂盒,不同Input DNA量推荐的Adapter使用量。

表2.  500 pg-1 μg Input DNA推荐的Adapter使用浓度

Input DNA

Adapter : Input DNA摩尔比

Input DNA

Adapter : Input DNA摩尔比

1 μg

10:1

50 ng

100:1

500 ng

20:1

25 ng

200:1

250 ng

40:1

1 ng

200:1

100 ng

100:1

500 pg

400:1


【注】:Input DNA摩尔数(pmol)≈ Input DNA质量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均长度(bp)]。

【接头添加计算举例】Input DNA为100 ng,Input DNA长度为300 bp时,接头应该添加多少?
第一步,计算Input DNA摩尔数。公式:Input DNA摩尔数(pmol)≈ Input DNA质量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均长度(bp)];
Input DNA摩尔数(pmol)=100 ÷(0.66×300)=0.5 pmol;
第二步,计算接头添加摩尔数。根据表2查询接头添加比例;
根据表2,查得Input DNA 100ng时接头添加比例100:1,则接头添加摩尔数=100×0.5 pmol=50 pmol;
第三步,计算接头添加体积。接头浓度=15 μmol/L(如使用其他接头,浓度需要依据其他接头浓度参数);
接头添加体积=接头添加摩尔数(50 pmol)÷接头浓度(15 μmol/L)=3.34 μL(注:15 μmol/L=15 pmol/μL)
综上,接头可添加3.4 μL。(注:接头最大加入体积不超过5 μL)


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货号

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