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产品描述
Taq DNA Ligase是一种耐高温连接酶，它能催化与同一互补靶DNA链杂交的两条相邻寡核苷酸链的5´-磷酸和3´-羟基之间形成磷酸二酯键。该催化反应只有当两条寡核苷酸链与互补靶 DNA 完全配对，且两条寡核苷酸链之间没有间隙的条件下才会发生。因此，可以用它来检测单碱基替换。Taq DNA连接酶以NAD+为辅酶因子，在45℃-65℃范围内均有活性。
产品组分
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组分编号 |
组分名称 |
产品编号/规格 |
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11051ES80 (1000 U) |
11051ES84 (2000 U) |
11051ES92 (10000 U) |
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11051-A |
Taq DNA Ligase (40 U/µL) |
25 μL |
50 μL |
5×50 μL |
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11051-B |
10×Taq DNA Ligase Buffer（含NAD+） |
250 μL |
500 μL |
5×500 μL |
来源
重组E. coli 菌株，含有从Thermus aquaticus HB8中克隆的连接酶基因。
产品应用
1）用连接酶检测反应和连接酶链式反应对等位基因进行特异性检测；
2）通过PCR扩增掺入磷酸化寡核苷酸进行诱变；
3）同源重组。
单位定义
在50 μL反应体系中，45℃条件下，孵育15 min能使50%的1 μg经BstEII消化的λDNA片段（12 bp粘性末端）发生连接所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。
质量控制
切口酶残留检测：40 U本品和0.5 μg IL23R质粒，37℃下孵育4 h，DNA的电泳谱带无变化。
核酸外切酶残留检测：40 U本品和0.5 μg λDNA-Hind Ⅲ，37℃下孵育4 h，DNA的电泳谱带无变化。
运输和保存方法
冰袋运输。-20℃保存，避免反复冻融。长时间（大于30天）保存时，B组分缓冲液应于-80℃保存。有效期一年。
注意事项
1）10×Taq DNA Ligase Buffer中含有辅酶因子NAD+，为了延长NAD+的半衰期，Buffer应于-80℃储存；
2）Taq DNA Ligase不能替代T4 DNA ligase；
3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
4）本产品仅作科研用途！
使用方法
1）反应体系配制：
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组分 |
用量 |
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DNA |
up to 1 µg |
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10×Taq DNA Ligase Buffer |
5 μL |
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Taq DNA Ligase(40 U/µL) |
2 μL |
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ddH2O |
up to 50 μL |
2）反应条件：45℃温育15 min。加入终止染液（50%甘油，50 mM EDTA和溴酚兰）终止反应。
HB220304
