Hieff^® 5'App T4 DNA Ligase可以特异性地将DNA预腺苷酸化的5’末端连接到DNA的3’末端，该酶连接不需要ATP，但是需要预腺苷酸化底物。与常规T4 DNA Ligase不同，5'App T4 DNA Ligase不能将底物的5’端腺苷酸化，因此它不能将磷酸化DNA的5’端连接到DNA的3’末端。该酶非常适用于NGS建库过程中DNA片段和5’预腺苷酰酸化接头的连接，可以显著减少片段自连（嵌合体形成）。

 

产品组分

组分编号	组分名称	产品编号/规格
		14960ES60 （100 KU）	14960ES70 （200 KU）
14960-A	Hieff® 5'App T4 DNA Ligase (2000 U/μL)	50 μL	100 μL
14960-B	5× T4 DNA Ligase Buffer	200 μL	500 μL

 

运输与保存方法

干冰运输，-25~-15°C保存，有效期1年。

 

注意事项

1. Buffer在溶解时，如果出现少量沉淀属正常现象，请颠倒混匀后使用。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

3. 本产品仅作科研用途! 

 

使用方法

与腺苷酸化接头的连接

1.  将所需试剂解冻后颠倒混匀，瞬时离心收集，置于冰上备用。

2. 在PCR管中配置以下反应体系（确保在冰上操作），使用移液器轻轻吹打或振荡混匀，瞬时离心收集。

名称	体积 (μL)
DNA片段	20
5× T4 DNA Ligase Buffer	6
App-Adapter	2
Hieff® 5'App T4 DNA Ligase (2000 U/μL)	2
Total	30

【注】：此体系即适用于平末端片段也适用于粘性末端片段的连接。

3. 将上述PCR管置于PCR仪，按照以下反应程序进行App接头连接

温度	时间
热盖105°C	Off
20°C	15 min
4°C	Hold

HB23010