产品说明书
FAQ
COA
已发表文献
产品描述
Hieff® Gold T4 DNA Ligase在ATP做辅酶的情况下可催化dsDNA 平末端或粘性末端相邻核酸的5’磷酸末端和3’羟基末端形成磷酸二酯键，还可催化RNA和双链中的ssDNA 或RNA 链连接，但不能催化全单链核苷酸间的连接。
本品主要适用于标记RNA 3’-末端，环化RNA和DNA寡聚核苷酸以及克隆cDNA等核酸操作。
产品组分
|
组分编号 |
组分名称 |
产品货号（规格） |
|
|
10300ES80（1000 U） |
10300ES97（50000 U） |
||
|
10300-A |
Hieff® Gold T4 DNA Ligase (5 U/µL) |
200 µL |
10 mL |
|
10300-B |
10 × Ligase Buffer |
400 µL |
20 mL |
运输和保存方法
冰袋运输。-20℃保存，有效期2年。
单位定义
在20 μL的连接反应体系中，6 μg的λDNA-Hind Ⅲ 分解物在16℃下反应30 min时，催化50%以上的DNA片段发生连接所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。
质量控制
核酸外切酶残留检测：10 U本品和0.5 μg λDNA-Hind Ⅲ，37℃下孵育4 h，DNA的电泳谱带无变化。
切口酶残留检测：10 U本品和0.5 μg IL23R质粒，37℃下孵育4 h，DNA的电泳谱带无变化。
注意事项
1）Buffer在融解时，如果出现少量沉淀属正常现象，请颠倒混匀后使用。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
3）本产品仅作科研用途！
使用方法
1. 在无菌微量离心管中配制以下反应体系：
|
组分 |
使用量 |
|
载体DNA |
50-100 ng |
|
插入片段 |
片段与载体的分子摩尔比应在3:1-5:1 |
|
10 × Ligase Buffer |
2 µL |
|
Hieff® Gold T4 DNA Ligase (5 U/µL) |
1 µL |
|
ddH2O |
To 20 µL |
【注】：平末端载体与DNA片段进行连接时，应先将载体进行去磷酸化处理，以防发生自连接现象。为提高连接效率，每20 µL反应体系中可以加2 µL 50% PEG 4000。
2. 16℃反应过夜。
3. 转化实验
1）将连接产物加入到100 µL 感受态细胞中（连接产物不应超过感受态细胞的1/10），轻弹混匀，冰上孵育30 min。
2）将离心管于42℃，热激90 sec（不要晃动），之后立刻置于冰水浴静置2-3 min。
3）向离心管中加入900 µL LB或SOC培养基，37℃，150 rpm，振荡培养45 min，该过程使菌体复苏，抗性基因表达。
4）2500 g 离心5 min，吸去900 µL上清，用剩余培养基重悬菌体，用无菌涂布棒将剩余菌体在正确抗性的平板上涂布均匀，待菌液被平板吸收后，37℃倒置培养过夜。
【注】：如果使用超级感受态细胞（转化效率＞108 cfu/µg），可直接吸取100-200 µL 37℃孵育后的菌液涂板，剩余菌液可在4℃保存，1周内均可重新涂板。
相关产品
|
产品名称 |
货号 |
规格 |
|
Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase 高保真DNA聚合酶HOT |
10148ES60/76/80 |
100/500/1000 U |
|
10907ES20 |
20 T |
|
|
10909ES20 |
20 T |
|
|
一步法快速克隆试剂盒HOT |
10911ES25/62 |
25/5×25 T |
|
10912ES10/50 |
10/5×10 T |
HB210924
