MGISP-960在转录组测序中的应用:昆虫样本的自动化文库构建流程

MGISP-960 在转录组测序中的应用:昆虫样本的自动化文库构建流程

18

2026-10-14

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01
目的:建立适用于昆虫RNA的转录组自动化建库流程
02
平台:MGISP-960(华大智造)
03
样本类型:昆虫组织样本提取的RNA

可选择翌圣MolPure® Micro Total RNA Kit超微量RNA快速提取试剂盒(Cat#19212)。

该产品采用微量DNA清除/RNA吸附通用柱技术和和新型的溶液体系,适用于从超微量的动物细胞、微切割组织和易裂解动物组织等样品提取总 RNA。全流程操作简便,8 min 即可完成RNA提取。处理范围一般为细胞(1个-5×105个)或者组织(< 5 mg)。DNA清除/RNA吸附通用柱技术配合特殊试剂配方不需DNA酶消化,有效清除gDNA残留,得到的RNA无DNA残留,可直接用于下游反转录荧光定量PCR或者高通量测序建库等试验。

04
从基因组到转录组:解码昆虫生命活动的动态奥秘

二代测序(NGS)技术的出现,如同为昆虫学研究推开了一扇通往微观世界的大门,使得科学家能够以前所未有的深度和广度探索昆虫的遗传奥秘,从全基因组水平揭示其适应性、抗药性及进化规律。然而,基因组是静态的“蓝图”,而生命活动是动态变化的。转录组测序(RNA-Seq)技术应运而生,它能够精准捕捉生物体在特定时空状态下所有基因的表达全貌,如同为研究者的“生命蓝图”添加了动态的“开关”与“调光”信息,从而在整体水平上揭示昆虫生长发育、生理代谢和行为背后的分子机制。

05
转录组测序在昆虫领域的核心应用
1.
生长发育与变态调控

通过比较不同发育阶段(卵、幼虫、蛹、成虫)或特定组织(如脂肪体、翅芽)的转录组,可以系统性鉴定调控昆虫生长、蜕皮、变态及生殖的关键基因和信号通路,为理解昆虫生命周期的内在程序提供基础数据。

2.
环境适应性研究

揭示昆虫如何应对温度变化、干旱、杀虫剂等环境胁迫的分子策略。例如,通过比较寒、温带昆虫或不同处理下的转录组差异,可以挖掘出与抗寒、耐热、解毒代谢相关的关键基因家族(如细胞色素P450、谷胱甘肽-S-转移酶等),为理解昆虫的生态适应性和进化提供直接证据。

3.
行为生态学与化学生态学

探究昆虫复杂行为(如嗅觉定位、觅食、交配)背后的分子基础。通过对触角等化学感受组织进行转录组测序,可大规模鉴定气味结合蛋白(OBPs)和嗅觉受体(ORs)基因家族,为揭示昆虫与宿主、配偶及环境之间的化学通讯网络提供依据。

4.
与寄主/天敌互作研究

在分子层面解析昆虫与植物、病原微生物或寄生蜂之间的攻防关系。通过同时或分别测序,可以鉴定昆虫在取食、寄生或感染过程中上调表达的攻击因子或防御基因,为害虫生物防治和抗性品种选育提供靶标。

5.
农林害虫治理与资源昆虫利用

一方面,通过研究害虫抗药性、入侵性和滞育等关键性状的转录调控机制,可为开发新型杀虫剂或绿色防控策略提供理论指导;另一方面,对于家蚕、蜜蜂等资源昆虫,转录组学可助力挖掘与蚕丝产量、蜜源利用等经济性状相关的优良基因,服务于分子育种。

06
建库试剂盒:

Hieff NGS® mRNA Isolation Master Kit V2 mRNA捕获纯化试剂盒(Cat#12629)

Hieff NGS® Ultima Dual-mode RNA Library Prep Kit(Premixed version)/ 管式预混版本RNA建库试剂盒(Cat#12310)

07
文库类型:MGI文库
08
自动化耗材和数量:

耗材名称

品牌

货号

所需数量

250μL盒装滤芯透明无菌吸头

Yeasen

83130ES

17盒

0.2mL 96孔PCR板,白色,全裙边

Yeasen

83560ES

9块

96孔深孔板,U底(1.3 mL)

Yeasen

83672ES

12块

09
实验条件及结果展示:

样本序号

1

2

3

4

样本类型

脑组织

物种

蝗虫

核酸浓度

923.4

1882.9

1813.1

1471.1

投入量

120ng

RNA富集方案

mRNA磁珠捕获

片段化条件

94℃ 7min

连接后纯化

0.55×

分选条件

0.60×/0.15×

扩增

14cc

扩增后纯化

0.8×

洗脱体积

28ul

文库浓度
(ng/ul)

15.6

24.8

36.6

35.6

10
片段大小:

11
翌圣生物产品解决方案:

产品类别

产品名称

货号

核酸提取

MolPure® Micro Total RNA Kit超微量RNA快速提取试剂盒

19212ES

MolPure® Flash Cell/Tissue Total RNA Kit 快速细胞/组织总 RNA 提取试剂盒

19221ES

mRNA富集

Hieff NGS® mRNA Isolation Master Kit V2 mRNA捕获纯化试剂盒

12629ES

Hieff NGS® MagSP rRNA Removal Kit (Drosophila) with purification beads/ 果蝇磁珠法rRNA去除

12270ES

Hieff NGS® MagSP rRNA Removal Kit (Ixodes scapular) with purification beads 磁珠法蜱虫核糖体去除试剂盒

12289ES

转录组建库试剂盒

Hieff NGS® Ultima Dual-mode RNA Library Prep Kit(Premixed version)/ 管式预混版本RNA建库试剂盒

12310ES

Hieff NGS® EvoMax RNA Library Prep Kit(dUTP) 预混/预装板式RNA建库试剂盒

12340ES

Hieff NGS® EvoMax RNA Library Prep Kit (dNTP)板式RNA建库试剂盒、预混版RNA建库试剂盒

12341ES

MGI建库接头

Hieff NGS® Unique Dual Barcode Primer Kit for MGI®

13350-13353ES

Illumina建库接头

Hieff NGS® Stubby UDI Primer Kit for Illumina®Set1/Set2/Set3/Set4(板式)

12327-12330ES

纯化磁珠

Hieff NGS® DNA selection Beads (Superior Ampure XP alternative)DNA纯化分选磁珠

12601ES

文库定量

1× dsDNA HS Assay Kit 即用型dsDNA qubit定量试剂

12642ES

自动化耗材

250μL盒装滤芯透明无菌吸头

83130ES

0.2mL 96孔PCR板,白色,全裙边

83560ES

96孔深孔板,U底(1.3 mL)

83672ES

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