本产品衔接Hieff NGS® Dual-mode RNA Library Prep Kit (Yeasen: Cat#12309ES)，替代其中的Frag/Prime buffer使用，用于RNA的片段化和一链cDNA合成步骤。Input RNA可以是total RNA，也可以是mRNA纯化的产物、rRNA去除的产物等。由于在Cat#12309ES中直接使用1×Frag/Prime Buffer去洗脱mRNA纯化或rRNA去除操作中所得的RNA，没有额外的体积用于添加含RNA的溶液。若Input RNA已经溶解于Nuclease free ddH₂O中，可选择本产品进行RNA片段化或一链cDNA合成反应。

 

组分信息

组分编号	组分名称	13487ES08	13487ES24	13487ES96	13487ES98
13487-A	4 × Frag/Prime Buffer	32 μL	96 μL	384 μL	4 mL

 

储存条件

-25~-15℃保存，有效期1年。

 

使用说明

当Input RNA不需要片段化处理时，请选择方案A；当Input RNA需要片段化处理时，请选择方案B。

A1. 若Input RNA无需片段化处理，可结合Cat#12309ES试剂，按照表1直接配制第一链cDNA合成反应体系。

表1 直接进行第一链cDNA合成反应体系

名称	体积 (μL)
Input RNA	13
4×Frag/Prime Buffer	4
Strand Specificity Reagent	6
1st Strand Enzyme Mix	2
Total	25

A2. 使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底，按照表2反应程序于PCR仪中进行一链合成反应。一链合成产物可衔接Cat#12309ES进行后续反应。

 

表2 第一链cDNA合成反应程序

温度	时间
热盖 105°C	On
25 °C	10 min
42°C	15 min
70°C	15 min
4°C	Hold

B1. 若Input RNA需要进行片段化处理，可按照3配制片段化体系进行RNA片段化。

表3 片段化反应体系

名称	体积 (μL)
Input RNA	13
4×Frag/Prime Buffer	4
Total	17

B2. 使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底，根据Input RNA的完整度和实验目的，参考Cat#12309ES说明书设置合适的片段化条件。

B3. 片段化产物进行一链cDNA合成，按照表4配制一链cDNA合成反应体系。

表4 第一链cDNA合成反应体系

名称	体积 (μL)
Fragmented RNA	17
Strand Specificity Reagent	6
1st Strand Enzyme Mix	2
Total	25

B4. 使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底，按照表2反应程序于PCR仪中进行一链合成反应。一链合成产物可衔接Cat#12309ES进行后续反应。

 

注意事项

1. 本产品仅作科研用途。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

3. 请使用无RNase污染的耗材，并对实验区域定期进行清理，推荐使用Thermo Fisher公司的RNAZap^TM 高效核酸去除喷雾去除RNA酶污染。

4.  Input RNA请溶于Nuclease free ddH₂O，避免Mg²⁺的存在干扰片段化效果；Input RNA最大投入体积为13 μL，在进行洗脱时请注意洗脱体积的选择。