Hifair® IV Reverse Transcriptase (200 U/μL)

更多活动更多优惠,尽在翌圣商城》

批量采购, 请点击询价

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

 

Hifair® IV Reverse Transcriptase是Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase基础上通过基因工程技术得到的全新逆转录酶,与Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比,其热稳定性大幅度提高,可耐受60℃,适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时,该酶增强了与模板的亲和力,适合低拷贝基因的逆转录和mRNA文库构建。Hifair® IV Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升,可扩增长达10 kb的cDNA

 

产品组分

编号

组分

产品编号/规格

11112ES92 (10000 U)

11112ES93 (10000 U)

11112-A

5×Hifair® IV Buffer

250 μL

1200 μL

11112-B

Hifair® IV Reverse Transcriptase (200 U/μL)

50 μL

250 μL

 

产品应用

全长cDNA文库构建;终点法PCR;实时定量PCR等。

 

活性定义

Poly(A) .Oligo(dT)为模板-引物,在37℃,10 min内,将1 nmol的dTTP掺入为酸不溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。

 

运输与保存方法

冰袋运输。-20ºC保存,有效期一年。

 

注意事项

1)请保持实验区域洁净;操作时需穿戴干净的手套、口罩;实验所用耗材均需保证RNase free,以防止RNase污染;

2)所有操作均应在冰上进行,防止发生RNA降解;

3)为保证逆转录成功,建议使用高质量的RNA样本;

4)为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

5)本产品仅做科研用途!

 

第一链cDNA合成操作步骤

1. RNA变性(此步为可选步骤,RNA变性有助于打开二级结构,可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。)

组分

使用量

RNase free ddH2O

to 13 μL

Oligo (dT)18 (50 μM)

or Random Primers (50 μM)  

or Gene Specific Primers(2 μM)

1 μL

or 1 μL

or 1 μL

模板RNA

Total RNA: 10 pg -5 μg或mRNA:1 pg-500 ng

65℃加热5 min,迅速置于冰上冷却2 min。简短离心收集反应液后加入下表中的逆转录反应液,并用移液器轻轻吹打混匀。

2. 逆转录反应液配制

组分

使用量

上一步的反应液

13 μL

5×Hifair® IV Buffer

4 μL

dNTP Mix(10 mM)

1 μL

Hifair® IV Reverse Transcriptase (200 U/μL)

1 μL

RNase Inhibitor (40 U/µL)

1 μL

3. 逆转录程序设置

温度

时间

25℃

5 min

50℃

15 min

85℃

5 min

【注】:1)当使用Random Primers时,需25℃,孵育5 min;若使用Oligo (dT)18Gene Specific Primers,此步可省略;

2)逆转录温度:推荐使用50℃。对于GC含量模板或者复杂模板,可将逆转录温度提高到55℃-60℃;

3)85℃加热5 min,目的是使逆转录酶失活。

※ 逆转录产物可立即用于后续PCR或qPCR反应,也可-20℃短期保存,若需长期保存,建议分装后,于-80℃保存,避免反复冻融。

HB221229

400-6111-883