基于MGISP-960自动化平台的葡萄叶DNA文库构建方法

2026-10-08

葡萄叶片富含多酚、多糖等次生代谢物，常规手工DNA文库构建易出现核酸降解、杂质残留、文库质量不稳定等问题，难以满足大规模种质资源分子鉴定的需求。本研究依托自动化测序文库建库平台，针对葡萄叶片的样本特性优化全流程参数，通过平台精准的程序化移液与磁珠分选，完成片段化、接头连接、扩增等步骤，大幅减少人工操作带来的误差。经验证，该方法制备的DNA文库片段分布集中、得率稳定，可实现最大96份样本的同步批量处理，显著提升建库效率。本研究为葡萄种质资源遗传多样性分析、功能基因定位等后续组学研究，提供了高效可靠的文库制备支撑。

目的：

建立适用于葡萄叶的全基因组重测序自动化建库流程

平台：MGISP-960（华大智造）

样本类型：葡萄叶

下游应用：葡萄种质资源遗传多样性分析、功能基因定位、葡萄精准栽培与绿色生产、葡萄次生代谢与功能开发等

建库试剂盒：Hieff NGS® OnePot Pro DNA Library Prep Kit V4 一步法DNA酶切建库试剂盒V4

货号：12972ES

文库类型：华大

自动化简版流程

流程分类	流程（其他设置默认按12972说明书内容执行，说明书可依据货号在官网搜索下载）
1 DNA片段化/末端修复/dA尾添加	① 加入样本，样本投入量：200ng （人工）； ② 进行片段化，片段程序选择30℃-15min。
2 接头连接	提前将接头从10uM稀释1.5倍（人工），加入片段化产物和连接试剂，进行连接程序孵育。
3 连接产物纯化和分选	① 对连接产物进行纯化，磁珠比例为0.8×； ② 对纯化产物进行片段分选，分选1磁珠比例：0.60×，分选2磁珠比例：0.15x。
4 文库扩增	将分选产物和扩增试剂混匀，进行扩增程序富余，扩增循环数选择6。
5 扩增产物纯化	对扩增产物进行纯化，磁珠比例为0.9×。
6 建库结束	建库结束，弹窗提醒人工取走文库。

案例结果展示（检测仪器：Qubit 4.0）

序号	物种	组织类型	文库浓度（ng/μL）	文库体积 (μL）	总文库产量（ng)	片段大小（bp）（抽检）
1	葡萄	幼叶	54.25	28	1519	471
2	葡萄	幼叶	51.33	28	1437	473
3	葡萄	幼叶	60.69	28	1699	471

片段大小图（抽检，检测仪器：Qsep）

结论：文库浓度均在51-60ng/uL之间，片段大小在470bp左右，满足后续上机测序需求。

相关核心产品目录

应用	产品货号	产品名称
RNA建库	12972ES	Hieff NGS® OnePot Pro DNA Library Prep Kit V4 一步法DNA酶切建库试剂盒V4
接头	13350ES	Hieff NGS® Unique Dual Barcode Primer Kit for MGI®, Set1（板式MGI平台接头，双端唯一短接头，Set1）
纯化磁珠	12601ES	Hieff NGS® DNA selection Beads (Superior Ampure XP alternative)DNA纯化分选磁珠
自动化耗材	83560ES	0.2 mL 96孔PCR板，白色，全裙边（NGS，伯乐款）
	83672ES	96孔深孔板，U底（1.3 mL)
	83130ES	250 μL盒装滤芯透明无菌吸头
	83624ES	荧光定量QPCR压敏封板膜，内附刮板
文库浓度测定	12642ES	1× dsDNA HS Assay Kit 即用型dsDNA qubit定量试剂
	83509ES	Qubit专用检测管
	80571ES	核酸定量仪荧光计Qubit（单通道）
文库条带大小检测	10516ES	GoldBand 100 bp plus DNA Ladder
	10202ES	YeaRed Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in Water) YeaRed 核酸染料（10,000× 水溶液）
	10208ES	Agarose琼脂糖
	60161ES	1x TAE Buffer，TAE 缓冲液(粉末)，PH 8.0，1L