Hieff NGS^® One-Step rRNA Removal Kit (Human，100-1,000 ng)利用靶向技术在cDNA合成过程中高特异性地抑制人总RNA中的核糖体RNA的逆转录，而不影响信使RNA (mRNA)、非编码RNA以及环状RNA等非靶RNA的cDNA合成，从而在一链cDNA合成过程中高特异性去除核糖体RNA。这种靶向去除技术相较于传统的RNase H消化法具有耗时短 (3 min)、操作简单（一步操作）和非靶RNA保留完整等优点，极大简化了操作流程和提高了建库效率，可以与市面上各类一链cDNA合成试剂配套。该试剂盒对于完整和部分降解的总RNA（如FFPE RNA）均具有良好的rRNA去除效果。经rRNA去除所获得的cDNA样本可用于高通量测序分析mRNA和非编码RNA，可显著提高测序结果中有效数据比例，也可用于其它cDNA下游应用。提供的试剂已经过严格的质量控制和功能验证，最大程度上保证了rRNA去除的稳定性和重复性。
 

适用范围

适用于人来源的100-1000 ng 总RNA样品；适用于完整或部分降解RNA（如FFPE RNA）样品。

 

产品组分

产品组份	12258ES08	12258ES24	12258ES96
One-Step rRNA Removal Mix	8 μL	24 μL	96 μL

 

运输与保存方法

干冰运输，-20°C存放。效期两年。

 

注意事项

一、关于操作

1. 请使用无RNase污染的耗材，并对实验区域定期进行清理，推荐使用Thermo Fisher公司的RNAZap™ 高效核酸去除喷雾去除RNA酶污染。

2. RNA样品应不含基因组DNA污染，若样品中有gDNA残留，应先进行DNase I消化并纯化后再用于本试剂盒。

3.若样品体积较大，可先进行浓缩。

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

5. 本产品仅作科研用途！

二、自备材料

1. qRT-PCR质检rRNA去除效率：Hieff^® qPCR SYBR Green Master Mix(No Rox) (Cat#11201)或其他等效产品；

2. 其他材料：无菌超纯水、低吸附枪头、PCR管、PCR仪等。

 

使用方法

一、操作流程

 

图1.使用快速去除核糖体RNA试剂盒+RNA建库试剂盒进行RNA建库流程

二、操作步骤

方案1：在逆转录体系中去除rRNA。

1. 使用翌圣生物的Hifair^® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit (Cat#11119)进行本试剂盒rRNA去除效率测试，其他逆转录试剂盒也可以用于本测试。

2. 逆转录反应体系配制（20 μL体系）

RNA不片段化体系			RNA片段化体系
Total RNA	100-1000 ng		Total RNA	100-1000 ng
Random Primers N6 (50 μM)	1 μL		Random Primers N6 (50 μM)	1 μL
One-Step rRNA Removal Mix	1 μL		One-Step rRNA Removal Mix	1 μL
RNase free ddH2O	To 14 μL		5×Hifair® Ⅱ Buffer	4 μL
混匀后瞬离，按照下列反应程序进行反应：			RNase free ddH2O	To 18 μL
75℃	1 min		混匀后瞬离，按照下列反应程序进行反应：
50℃	2 min		94℃（片段化温度和时间可根据需求自行调整）	5 min
4℃	Hold		75℃	1 min
			50℃	2 min
上述反应体系	14 μL		4℃	Hold
5×Hifair® Ⅱ Buffer	4 μL
Hifair® Ⅱ Enzyme Mix	2 μL		上述反应体系	18 μL
Total	20 μL		Hifair® Ⅱ Enzyme Mix	2 μL
混匀后瞬离，按照下列反应程序进行反应：			Total	20 μL
25℃	5 min		混匀后瞬离，按照下列反应程序进行反应：
42℃	30 min		25℃	5 min
85℃	5 min		42℃	15 min
			85℃	5 min

 

3. qPCR检测rRNA去除效果。

 

图2. qPCR验证一步rRNA快速去除试剂盒的去除效果

方案2：在RNA NGS文库构建中去除rRNA。

1. 使用翌圣生物的Hieff NGS^® Dual-mode RNA Library Prep Kit (Cat#12252 for Illumina, Cat#13333for MGI)进行本试剂盒rRNA去除效率测试。

RNA片段化
组份	体积
Total RNA	100-1000 ng
2×Frag/Prime Buffer	8.5 μL
One-Step rRNA Removal Mix	1 μL
DEPC H2O	to 17 μL
混匀后瞬离，按照下列反应程序进行反应：
温度	时间
94℃（片段化温度和时间可根据需求自行调整）	5 min
75℃	1 min
50℃	2 min
4℃	Hold
组份	体积
上述反应体系	17 μL
Strand Specificity Reagent	6 μL
1st Strand Enzyme Mix	2 μL
Total	25 μL
混匀后瞬离，按照下列反应程序进行反应：
温度	时间
25℃	10 min
42℃	15 min
70℃	15 min
接Step 2第二链cDNA的合成/末端修复/加A

 

 

 

图3. 二代测序验证一步rRNA快速去除试剂盒的去除效果

 

 

2. 使用New England Biolabs的NEBNext Ultra II Directional RNA Library Prep Kit for Illumina (Cat#E7760)联合本试剂盒进行rRNA去除方案。
 

RNA片段化
组份	体积
Total RNA	100-1,000 ng
First Strand Synthesis Reaction Buffer (5×)	4 μL
Random Primers	1 μL
One-Step rRNA Removal Mix	1 μL
DEPC H2O	to 10 μL
混匀后瞬离，按照下列反应程序进行反应：
温度	时间
94℃（片段化温度和时间可根据需求自行调整）	5 min
75℃	1 min
50℃	2 min
4℃	Hold
接下游一链合成体系

3. 其他品牌RNA 建库试剂盒请咨询Yeasen！

 

HB210923