MGISP-960在动物病原检测中的应用:DNA/RNA共建库方案的自动化流程

MGISP-960在动物病原检测中的应用:DNA/RNA共建库方案的自动化流程

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2026-10-09

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01 目的:建立适用于动物病原核酸DNA/RNA共建库的自动化建库流程

02 平台:MGISP-960(华大智造)

03 样本类型:血液、拭子样本中提取的病原核酸

可选择翌圣MolPure® Magnetic Pathogen DNA/RNA Kit 磁珠法病原DNA/RNA提取试剂盒(Cat#18306)。

该产品适用于从生物液体样本如宫颈拭子保护液(建议不使用含高浓度胍盐保护液)、全血、血浆、痰液、肺泡灌洗液、脑脊液等样本中提取病原微生物核酸,该方法采用磁珠纯化技术,提取过程中无需使用有毒的酚氯仿抽提,安全无毒且快捷。该方法采用化学法与机械法相结合的裂解方式,纯化的核酸包括病毒、支原体、细菌、真菌等微生物的核酸,得到的产物可直接用于 PCR、qPCR、宏基因组文库构建、DNA/RNA共建库等实验。配合磁珠法自动化提取仪器使用,可实现核酸的高通量提取。

04 mNGS动物疫病检测介绍:

     mNGS宏基因组高通量测序是新一代无偏向性病原检测技术,专为动物疫病复杂检测场景研发,突破传统检测技术局限。该技术无需微生物纯培养、无需预设病原靶点,可直接对畜禽、水产等动物样本中的全部核酸进行高通量测序分析。能够一次性全面覆盖病毒、细菌、真菌、寄生虫等各类致病病原,精准识别已知病原、变异毒株及未知新发疫病病原。有效解决传统检测漏检率高、检测周期长、无法鉴别混合感染等行业痛点,是当前动物疫病精准诊断、疫情防控的核心技术手段。

05 mNGS方案在动物疫病检测中的应用及核心意义

1、疑难不明疫病排查,破解诊断盲区

在畜禽批量突发死亡、不明原因发热、常规检测阴性、经验诊疗无效等疑难场景中,传统检测手段难以快速锁定病因。mNGS凭借无偏向性全病原筛查优势,可一次性完成多类别病原全景扫描,快速甄别单一感染、混合感染、继发感染等复杂致病情况。彻底打破传统检测“逐项排查、耗时低效”的困境,快速明确疫病致病根源,为临床精准救治、疫病止损提供关键诊断依据,大幅降低养殖产业突发疫病造成的经济损失。

2、新发变异病原识别,筑牢防疫防线

动物疫病存在病原变异、新发疫病频发的特点,传统靶向检测技术仅能识别已知固定病原,极易出现变异株漏检、新发病源无法识别的问题。mNGS技术不依赖已知病原数据库,可精准捕捉病原基因突变、毒株重组特征,快速发现新型疫病病原、逃逸变异株及稀有致病菌株。能够第一时间预警新发、变异动物疫情,填补未知疫病检测空白,助力养殖行业提前规避新型疫病风险,完善动物疫病常态化预警体系。

3、疫病溯源与流行监测,实现精准管控

mNGS可通过病原全基因组测序,精准解析病原基因型、进化特征及传播路径,实现动物疫病的流行病学精准溯源。可精准区分疫病本土流行株与输入性毒株,明确疫病传播链条、感染来源及扩散规律,为养殖场引种检疫、区域疫病流行监测、跨区域疫病传播防控提供数据支撑。同时可长期监测病原种群演变趋势,助力行业优化疫苗研发、疫病防控方案,推动动物疫病从“被动救治”向“主动防控”转型。

4、人畜共患病筛查,守护公共卫生安全

多数动物疫病具备人畜共患传播风险,是公共卫生安全的重要隐患。mNGS可高效筛查各类人畜共患病病原,精准识别动物体内隐性带菌、隐性感染情况,提前发现跨物种传播风险隐患。通过常态化动物样本筛查,从源头阻断人畜共患病传播链条,既保障畜禽养殖安全,又筑牢人居公共卫生安全防线,实现养殖产业安全与公共卫生安全双重保障。

5、助力养殖标准化,赋能产业提质增效

相较于传统检测技术,mNGS检测周期短、准确率高、覆盖病原广,可适配规模化养殖场、养殖园区、第三方检测机构的批量检测、常态化筛查需求。通过精准的疫病检测与风险预判,有效减少盲目用药、无效消杀等养殖成本损耗,降低畜禽病死率,提升养殖存活率与产品品质。同时推动动物疫病检测流程标准化、精细化,助力养殖行业科学化、规范化、智能化升级,赋能畜牧水产养殖产业高质量发展。

06 建库试剂盒:

Hieff NGS® ds-cDNA Synthesis Kit(Cat#13488)

Hieff NGS® OnePot Flash DNA Library Prep Kit/ 低背景病原快速酶切DNA建库试剂盒(Cat#12316) 

07 文库类型:MGI文库

08 自动化耗材和数量:

耗材名称

品牌

货号

所需数量

250μL盒装滤芯透明无菌吸头

Yeasen

83130ES

10盒

0.2mL 96孔PCR板,白色,全裙边

Yeasen

83560ES

9块

96孔深孔板,U底(1.3 mL)

Yeasen

83672ES

7块

09 实验条件及结果展示:

样本序号

1

2

3

4

5

6

样本类型

动物血液样本提取的病原核酸(DNA+RNA)

投入量

固定体积投入14ul

cDNA合成

使用翌圣产品Cat#13488,cDNA产物不纯化直接投入建库

片段化条件

30℃ 8min

连接后纯化

0.55×

index Primer

MGI 短接头(Cat#13350-13354)

扩增

12cc

分选

扩增产物补水至100ul后进行分选
0.55×/0.2×

洗脱体积

30ul

文库浓度

58.4

52.4

56.4

72.4

58.6

53.4

10 翌圣生物产品解决方案:

产品类别

产品名称

货号

核酸提取

MolPure® Magnetic Universal Viral DNA/RNA Kit 磁珠法通用病毒DNA/RNA提取试剂盒

18521ES

MolPure® Magnetic Pathogen DNA/RNA Kit 磁珠法病原DNA/RNA提取试剂盒

18306ES

MolPure® Mag BL Pathogen DNA/RNA Kit 磁珠法血液病原DNA/RNA提取试剂盒

18307ES

cDNA合成

Hieff NGS® ds-cDNA Synthesis Kit(RNA逆转录和二链cDNA合成试剂,不含gDNA消化,低背景菌版本)

13488ES

Hieff NGS® C37P3 ds-cDNA Synthesis Kit(gDNA digester plus)(RNA逆转录和二链cDNA合成试剂,含gDNA消化,低背景菌版本)

13501ES

rRNA去除

Hieff NGS® One-Step rRNA Removal Kit (Human)/ 3分钟快速核糖体去除试剂(适用人)

12258ES

cDNA&gDNA建库

Hieff NGS® OnePot Flash DNA Library Prep Kit/ 低背景病原快速酶切DNA建库试剂盒

12316ES

Hieff NGS® C37P4 OnePot cDNA&gDNA Library Prep Kit(DNA&RNA共建库试剂盒,低背景菌版本)

13502ES

MGI建库接头

Hieff NGS® Unique Dual Barcode Primer Kit for MGI®

13350-13353ES

Illumina建库接头

Hieff NGS® Stubby UDI Primer Kit for Illumina®Set1/Set2/Set3/Set4(板式)

12327-12330ES

纯化磁珠

Hieff NGS® DNA selection Beads (Superior Ampure XP alternative)DNA纯化分选磁珠

12601ES

文库定量

1× dsDNA HS Assay Kit 即用型dsDNA qubit定量试剂

12642ES

自动化耗材

250μL盒装滤芯透明无菌吸头

83130ES

0.2mL 96孔PCR板,白色,全裙边

83560ES

96孔深孔板,U底(1.3 mL)

83672ES

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