本产品衔接Hieff NGS^® Dual-mode RNA Library Prep Kit (Yeasen: Cat#12309)，替代其中的Frag/Prime buffer使用，用于RNA的片段化和一链cDNA合成步骤。Input RNA可以是total RNA，也可以是mRNA纯化的产物、rRNA去除的产物等。由于在Cat#12309中直接使用1×Frag/Prime Buffer去洗脱mRNA纯化或rRNA去除操作中所得的RNA，没有额外的体积用于添加含RNA的溶液。若Input RNA已经溶解于Nuclease free ddH₂O中，可选择本产品进行RNA片段化或一链cDNA合成反应。

 

产品组分

组分编号	组分名称	8 T	24 T	96 T
11377-A	2 × Frag/Prime Buffer	68 μL	204 μL	816 μL

 

运输与保存方法

干冰运输。-20 °C存放，有效期一年。

 

注意事项

1. 请使用无RNase污染的耗材，并对实验区域定期进行清理，推荐使用Thermo Fisher公司的RNAZap^TM 高效核酸去除喷雾去除RNA酶污染。

2. Input RNA请溶于Nuclease free ddH₂O，避免Mg²⁺的存在干扰片段化效果；Input RNA最大投入体积为8.5 μL，在进行洗脱时请注意洗脱体积的选择。

3. 本产品仅作科研用途！为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

 

使用方法

当Input RNA不需要片段化处理时，请选择方案A；当Input RNA需要片段化处理时，请选择方案B。

A1. 若Input RNA无需片段化处理，可结合Cat#12309试剂，按照表1直接配制第一链cDNA合成反应体系。

表1 直接进行第一链cDNA合成反应体系

名称	体积 (μL)
Input RNA	8.5
2×Frag/Prime Buffer	8.5
Strand Specificity Reagent	6
1st Strand Enzyme Mix	2
Total	25

A2. 使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底，按照表2反应程序于PCR仪中进行一链合成反应。一链合成产物可衔接Cat#12309进行后续反应。

表2 第一链cDNA合成反应程序

温度	时间
热盖 105 °C	On
25 °C	10 min
42 °C	15 min
70 °C	15 min
4 °C	Hold

B1. 若Input RNA需要进行片段化处理，可按照3配制片段化体系进行RNA片段化。

表3 片段化反应体系

名称	体积 (μL)
Input RNA	8.5
2×Frag/Prime Buffer	8.5
Total	17

B2. 使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底，根据Input RNA的完整度和实验目的，参考Cat#12309说明书设置合适的片段化条件。

B3. 片段化产物进行一链cDNA合成，按照表4配制一链cDNA合成反应体系。

表4 第一链cDNA合成反应体系

名称	体积 (μL)
Fragmented RNA	17
Strand Specificity Reagent	6
1st Strand Enzyme Mix	2
Total	25

B4. 使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底，按照表2反应程序于PCR仪中进行一链合成反应。一链合成产物可衔接Cat#12309进行后续反应。

HB220803