基于MGISP-960自动化平台的人血液gDNA样本重测序文库构建方法
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2026-08-04
全基因组重测序是挖掘基因组变异、开展遗传研究的核心技术，传统血液gDNA文库构建多依赖人工操作，存在通量低、重复性差、人为误差大等问题，难以满足大批量样本测序需求。本文基于MGISP-960高通量自动化样本制备平台，优化建立血液gDNA重测序文库构建方法。该方法实现建库全流程自动化操作，有效规避人工操作偏差，提升文库构建效率与均一性，流程稳定可控，可适配大批量血液样本的标准化重测序建库需求，为高通量基因组测序研究提供可靠技术支撑。
目的：建立适用于人血液gDNA样本的重测序自动化建库流程
平台：MGISP-960（华大智造）
样本类型：人血液gDNA
下游应用：肿瘤易感基因筛查、遗传病诊断、药物基因组学
建库试剂盒：Hieff NGS® OnePot Pro DNA Library Prep Kit V4 一步法DNA酶切建库试剂盒V4
货号：12972ES
文库类型：华大
自动化简版流程
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流程分类 |
流程（其他设置默认按12972说明书内容执行，说明书可依据货号在官网搜索下载） |
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1 DNA片段化/末端修复/dA尾添加 |
① 加入样本，样本投入量：100ng （人工）； ② 进行片段化，片段程序选择35℃-15min。 |
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2 接头连接 |
提前将接头从10uM稀释到5uM（人工），加入片段化产物和连接试剂，进行连接程序孵育。 |
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3 连接产物纯化和分选 |
① 对连接产物进行纯化，磁珠比例为0.8×； ② 对纯化产物进行片段分选，分选1磁珠比例：0.68×，分选2磁珠比例：0.20x。 |
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4 文库扩增 |
将分选产物和扩增试剂混匀，进行扩增程序富余，扩增循环数选择6。 |
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5 扩增产物纯化 |
对扩增产物进行纯化，磁珠比例为0.9×。 |
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6 建库结束 |
建库结束，弹窗提醒人工取走文库。 |
案例结果展示（抽检，检测仪器：Qubit 4.0）
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序号 |
样本 |
Qubit浓度（ng/μL) |
文库体积（μL） |
产量（ng) |
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1 |
人血液gDNA-A |
39 |
28 |
1092 |
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2 |
人血液gDNA-B |
42.6 |
28 |
1192.8 |
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3 |
人血液gDNA-C |
45 |
28 |
1260 |
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4 |
人血液gDNA-D |
39.6 |
28 |
1108.8 |
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5 |
人血液gDNA-E |
35.8 |
28 |
1002.4 |
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6 |
人血液gDNA-F |
29.2 |
28 |
817.6 |
片段大小图（检测方法：琼脂糖凝胶电泳）
结论：文库浓度均在29-45ng/uL之间，片段大小在350bp左右，满足后续上机测序需求。
相关核心产品目录
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应用 |
产品货号 |
产品名称 |
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RNA建库 |
Hieff NGS® OnePot Pro DNA Library Prep Kit V4 一步法DNA酶切建库试剂盒V4 |
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接头 |
Hieff NGS® Unique Dual Barcode Primer Kit for MGI®, Set1（板式MGI平台接头，双端唯一短接头，Set1） |
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纯化磁珠 |
Hieff NGS® DNA selection Beads (Superior Ampure XP alternative)DNA纯化分选磁珠 |
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自动化耗材 |
0.2 mL 96孔PCR板，白色，全裙边（NGS，伯乐款） |
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96孔深孔板，U底（1.3 mL) |
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250 μL盒装滤芯透明无菌吸头 |
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荧光定量QPCR压敏封板膜，内附刮板 |
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文库浓度测定 |
1× dsDNA HS Assay Kit 即用型dsDNA qubit定量试剂 |
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Qubit专用检测管 |
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核酸定量仪荧光计Qubit（单通道） |
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文库条带大小检测 |
GoldBand 100 bp plus DNA Ladder |
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YeaRed Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in Water) YeaRed 核酸染料（10,000× 水溶液） |
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Agarose琼脂糖 |
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1x TAE Buffer，TAE 缓冲液(粉末)，PH 8.0，1L |
