白细胞介素-18(IL-18),也称为IL-1F4,是一种属于IL-1超家族的促炎细胞因子,由巨噬细胞和其他细胞产生。成熟的人IL-18与小鼠和大鼠IL-18具有大约63%的氨基酸序列同一性。IL-18的激活是由感染或组织损伤诱导的,并导致慢性炎症的疾病病理学。在IL-12或IL-15存在的情况下,IL-18通过诱导IFN-γ的产生以及CD8+T细胞和NK细胞的溶解活性来增强抗病毒Th1免疫应答。在不存在IL-12或IL-15的情况下,IL-18促进CD4+T细胞和嗜碱性粒细胞产生Th2细胞因子IL-4和IL-13。IL-18还促进髓系树突状细胞成熟并触发中性粒细胞呼吸爆发。在癌症中,IL-18表现出多种活性,包括增强抗肿瘤免疫、抑制或促进血管生成、促进肿瘤细胞转移。
翌圣Mouse IL-18 ELISA(酶联免疫吸附测定)试剂盒是一种体外酶联免疫吸附测定试剂盒,用于定量测定血清、血浆中的小鼠白介素18(Mouse IL-18)。特异性抗小鼠白介素18抗体预包被在高亲和力的酶标板上。酶标板孔中加入标准品、待测样本,经过孵育,样本中存在的小鼠白介素18与固相抗体结合。洗涤去除未结合的物质后,加入检测抗体孵育结合,经洗涤,再加入酶结合物(Streptavidin-HRP)孵育结合。洗涤后,加入显色底物 TMB,避光显色。颜色反应的深浅与样本中小鼠白介素18的浓度成正比。加入终止液终止反应,在450 nm 波长(参考波长570 - 630 nm)测定吸光度值。
货号 |
98011ES48 / 98011ES96 |
规格 |
48 T / 96 T |
检测范围 |
31.25-2000 pg/mL |
检测方法 |
双抗夹心法 |
检测物种 |
小鼠 |
检测时长 |
4.5小时 |
灵敏度 |
17.44 pg/mL |
稀释线性 |
82 - 121% |
回收率 |
93 - 124% |
板内差 |
3.6% |
板间差 |
5.2% |
浓度(pg/mL) |
显色值 |
平均值 |
校准值 |
|
2000 |
2.719 |
2.785 |
2.752 |
2.207 |
1000 |
1.794 |
1.769 |
1.782 |
1.296 |
500 |
1.097 |
1.017 |
1.057 |
0.683 |
250 |
0.611 |
0.570 |
0.590 |
0.346 |
125 |
0.342 |
0.309 |
0.325 |
0.183 |
62.5 |
0.197 |
0.180 |
0.189 |
0.108 |
31.25 |
0.125 |
0.113 |
0.119 |
0.074 |
0 |
0.040 |
0.039 |
0.040 |
/ |
数据拟合绘制标准曲线,生成的标曲用于实验数据分析。
标准曲线图
IL-18的最低检测限为17.44 pg/mL,通过使用重复检测20次零孔OD值的均值与标准差计算得出。
酶标板内精密度
3个已知浓度的样本酶标板内重复测定8次,评估酶标板内的精密度。
酶标板间精密度
3个已知浓度的样本酶标板间重复检测24次,评估酶标板间的精密度。
项目 |
板内精密度 |
板间精密度 |
||||
样本 |
1 |
2 |
3 |
1 |
2 |
3 |
8 |
8 |
8 |
24 |
24 |
24 |
|
平均值 |
1287.1 |
282.8 |
98.3 |
1273.2 |
283.6 |
102.4 |
标准差 |
43.8 |
11.1 |
3.4 |
75.4 |
11.7 |
5.6 |
变异系数(%) |
3.4 |
3.9 |
3.5 |
5.9 |
4.1 |
5.5 |
通过不同水平的IL-18添加于样本中来测定回收率,其回收率如下:
样本类型 |
平均回收率(%) |
范围(%) |
血清 |
117.5 |
100.3-124.3 |
血浆 |
106.1 |
93.3-113.8 |
细胞培养上清 |
111.8 |
100.8-121.6 |
血清稀释比例 |
平均期望值(%) |
范围(%) |
1:02 |
97.5 |
91.1-103.9 |
1:04 |
99.9 |
94.9-108.5 |
1:08 |
104.1 |
99.1-108.3 |
1:16 |
99.3 |
93.6-106.3 |
血浆稀释比例 |
平均期望值(%) |
范围(%) |
1:02 |
101.5 |
85.2-112.2 |
1:04 |
94.5 |
89.5-103.7 |
1:08 |
109.6 |
98.4-120.3 |
1:16 |
105.8 |
92.3-116.3 |
细胞培养上清稀释比例 |
平均期望值(%) |
范围(%) |
1:02 |
93.0 |
81.7-102.8 |
1:04 |
97.4 |
93.1-101.5 |
1:08 |
114.0 |
104.5-120.7 |
1:16 |
110.1 |
95.2-120.0 |
应用本试剂盒,检测若干健康志愿者的样本,志愿者的用药史不详。
样本类型 |
样本数目 |
平均值(pg/mL) |
样本值(pg/mL) |
血清 |
10 |
71.6 |
n.d.-142.1 |
血浆 |
8 |
87.1 |
n.d.-179.8 |
细胞培养上清 |
4 |
n.d. |
n.d. |
n.d. 指样本浓度值低于检测范围内得31.25 pg/mL
本试剂盒识别天然和重组小鼠白介素18。下述因子进行了特异性的评估,没有观察到明显的交叉反应和干扰影响。
Recombinant human: |
Recombinant Mouse: |
|
GM-CSF |
IL-6 |
IFN-γ |
IFN-γ |
IL-10 |
IL-1α |
IL-1α |
IL-12 |
IL-1β |
IL-1β |
IL-17A |
IL-4 |
IL-2 |
IL-18 |
IL-6 |
IL-3 |
IL-23 |
IL-10 |
IL-4 |
TNF-α |
IL-17A |
IL-5 |
|
TNF-α |
问题 |
造成原因 |
解决方法 |
标曲不好 |
移液量不准确 |
检查移液器,按时校准,仔细操作,充分混匀时盖紧管口并尽量避免泡沫。 |
稀释方法不恰当 |
||
显色值偏低 |
孵育时间太短 |
给予足够的孵育时间,样本和溶解的标准品隔夜后更换。 |
移液量不足或稀释不当 |
校准移液器和规范操作 |
|
CV偏高 |
酶标板清洗不当 |
使用正确的洗涤工序;如果使用洗板机,检查所有的端口是否堵塞。 |
受污染的洗液 |
准备新鲜洗液 |
|
灵敏度较低 |
试剂盒储存不当 |
按照产品组分表进行保存。 |