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产品简介
白细胞介素12（IL-12）是一种异二聚体多效性细胞因子，由p40亚基和p35亚基组成，IL-12 p40亚基由IL-23共享。IL-23是另一种异二聚体细胞因子，由一个独特的 p19 亚基和 IL-12 的 p40 亚基组成，具有与IL-12相似和不同的生物活性。IL-12由巨噬细胞和B细胞产生，已被证明对T细胞和自然杀伤（NK）细胞有多种作用。IL-23由活化的树突状细胞和巨噬细胞分泌，并通过IL-23R与IL-12Rβ1复合的受体发出信号。IL-23已被证明能增强记忆性T细胞的增殖。
翌圣Mouse IL-12/IL-23 p40 ELISA(酶联免疫吸附测定)试剂盒是一种体外酶联免疫吸附测定试剂盒，用于定量测定血清、血浆中的小鼠p40(Mouse IL-12/IL-23 p40)。特异性抗小鼠p40抗体预包被在高亲和力的酶标板上。酶标板孔中加入标准品、待测样本，经过孵育，样本中存在的小鼠p40与固相抗体结合。洗涤去除未结合的物质后，加入检测抗体孵育结合，经洗涤，再加入酶结合物(Streptavidin-HRP)孵育结合。洗涤后，加入显色底物 TMB，避光显色。颜色反应的深浅与样本中小鼠p40的浓度成正比。加入终止液终止反应，在450 nm 波长(参考波长570 - 630 nm)测定吸光度值。
产品信息
|
货号 |
98026ES48 / 98026ES96 |
|
规格 |
48 T / 96 T |
|
检测范围 |
31.25-2000 pg/mL |
|
检测方法 |
双抗夹心法 |
|
检测时长 |
4.5小时 |
|
灵敏度 |
14.87 pg/mL |
|
稀释线性 |
89 - 124% |
|
回收率 |
94 - 107% |
|
板内差 |
4.6% |
|
板间差 |
5.2% |
实验数据
- 标曲数据
数据拟合绘制标准曲线，生成的标曲用于实验数据分析。
标准曲线图
|
浓度（pg/mL） |
显色值 |
平均值 |
校准值 |
|
|
2000 |
1.967 |
1.883 |
1.925 |
1.925 |
|
1000 |
1.143 |
1.094 |
1.118 |
1.117 |
|
500 |
0.655 |
0.643 |
0.649 |
0.657 |
|
250 |
0.419 |
0.413 |
0.416 |
0.399 |
|
125 |
0.266 |
0.221 |
0.243 |
0.256 |
|
62.5 |
0.190 |
0.170 |
0.180 |
0.178 |
|
31.25 |
0.137 |
0.130 |
0.134 |
0.135 |
|
0 |
0.086 |
0.084 |
0.085 |
/ |
- 灵敏度检测
IL-12/IL-23 p40的最低检测限为14.87 pg/mL，通过使用重复检测20次零孔OD值的均值与标准差计算得出。
- 精密度检测
酶标板内精密度
3个已知浓度的样本酶标板内重复测定8次，评估酶标板内的精密度。
酶标板间精密度
3个已知浓度的样本酶标板间重复检测30次，评估酶标板间的精密度。
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项目 |
板内精密度 |
板间精密度 |
||||
|
样本 |
1 |
2 |
3 |
1 |
2 |
3 |
|
8 |
8 |
8 |
30 |
30 |
30 |
|
|
平均值 |
764.4 |
202.1 |
82.0 |
780.6 |
197.6 |
80.5 |
|
标准差 |
36.0 |
8.4 |
4.1 |
37.8 |
8.4 |
5.2 |
|
变异系数（%） |
4.7 |
4.2 |
5.0 |
4.8 |
4.3 |
6.5 |
- 回收率检测
通过不同水平的IL-12/IL-23 p40添加于样本中来测定回收率，其回收率如下:
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样本类型 |
平均回收率(%) |
范围（%） |
|
血清 |
98.3 |
94.4-103.8 |
|
101.8 |
95.7-106.8 |
- 稀释线性检测
|
血清稀释比例 |
平均期望值(%) |
范围（%） |
|
1:02 |
109.9 |
102.4-117.9 |
|
1:04 |
106.0 |
93.3-112.9 |
|
1:08 |
109.4 |
101.5-116.0 |
|
1:16 |
113.0 |
101.0-121.7 |
|
血浆稀释比例 |
平均期望值(%) |
范围（%） |
|
1:02 |
108.7 |
99.0-116.3 |
|
1:04 |
110.2 |
97.2-124.0 |
|
1:08 |
111.4 |
103.8-119.0 |
|
1:16 |
100.7 |
89.2-116.3 |
|
细胞培养上清稀释比例 |
平均期望值(%) |
范围（%） |
|
1:02 |
93.5 |
91.7-95.7 |
|
1:04 |
94.7 |
91.3-99.9 |
|
1:08 |
101.1 |
96.8-108.8 |
|
1:16 |
102.8 |
96.5-107.2 |
- 样本值
应用本试剂盒，检测若干健康志愿者的样本，志愿者的用药史不详。
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样本类型 |
样本数目 |
平均值（pg/mL） |
样本值（pg/mL） |
|
血清 |
8 |
160.1 |
157.1-171.9 |
|
细胞培养上清 |
4 |
n.d. |
n.d. |
n.d. 指样本浓度值低于检测范围内得31.25 pg/mL
- 测定特异性
本试剂盒识别天然和重组小鼠p40。下述因子进行了特异性的评估，没有观察到明显的交叉反应和干扰影响。
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Recombinant human: |
Recombinant Mouse: |
|
|
GM-CSF |
IL-6 |
IFN-γ |
|
IFN-γ |
IL-10 |
IL-1α |
|
IL-1α |
IL-12 |
IL-1β |
|
IL-1β |
IL-17A |
IL-4 |
|
IL-2 |
IL-23 |
IL-6 |
|
IL-3 |
TNF-α |
IL-10 |
|
IL-4 |
|
IL-17A |
|
IL-5 |
|
TNF-α |
检测简图
疑问解答
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问题 |
造成原因 |
解决方法 |
|
标曲不好 |
移液量不准确 |
检查移液器，按时校准，仔细操作，充分混匀时盖紧管口并尽量避免泡沫。 |
|
稀释方法不恰当 |
||
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显色值偏低 |
孵育时间太短 |
给予足够的孵育时间，样本和溶解的标准品隔夜后更换。 |
|
移液量不足或稀释不当 |
校准移液器和规范操作 |
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CV偏高 |
酶标板清洗不当 |
使用正确的洗涤工序；如果使用洗板机，检查所有的端口是否堵塞。 |
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受污染的洗液 |
准备新鲜洗液 |
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|
灵敏度较低 |
试剂盒储存不当 |
按照产品组分表进行保存。 |
