人白介素2 (Human IL-2)也被称为T细胞生长因子,是一种15-18kDa的可变糖基化α螺旋多肽,由第4号染色体上的一个基因编码。可由CD4+和CD8+T细胞、γδT细胞、B细胞、树突状细胞和嗜酸性粒细胞表达。IL-2/IL-2R信号传导是T细胞增殖和其他免疫反应基本功能所必需的。成熟的人IL-2与小鼠和大鼠IL-2分别具有56%和66%的氨基酸序列同一性。人和小鼠IL-2表现出跨物种活性。IL-2能诱导和增强细胞毒活性,可应用治疗某些疾病、特别是对肿瘤治疗;还有病毒感染、免疫缺陷病及自身免疫病等治疗。
翌圣Human IL-2 ELISA(酶联免疫吸附测定)试剂盒是一种体外酶联免疫吸附测定试剂盒,用于定量测定血清、血浆中的人白介素2(Human IL-2)。特异性抗人白介素2抗体预包被在高亲和力的酶标板上。酶标板孔中加入标准品、待测样本,经过孵育,样本中存在的人白介素2与固相抗体结合。洗涤去除未结合的物质后,加入检测抗体孵育结合,经洗涤,再加入酶结合物(Streptavidin-HRP)孵育结合。洗涤后,加入显色底物 TMB,避光显色。颜色反应的深浅与样本中人白介素2的浓度成正比。加入终止液终止反应,在450 nm 波长(参考波长570 - 630 nm)测定吸光度值。
货号 |
97029ES48 / 97029ES96 |
规格 |
48 T / 96 T |
检测范围 |
15.63-1000 pg/mL |
检测方法 |
双抗夹心法 |
检测物种 |
人 |
检测时长 |
4.5小时 |
灵敏度 |
3.06 pg/mL |
稀释线性 |
78 - 116% |
回收率 |
77 - 89% |
板内差 |
6.3% |
板间差 |
8.7% |
数据拟合绘制标准曲线,生成的标曲用于实验数据分析。
标准曲线图
浓度(pg/mL) |
显色值 |
平均值 |
校准值 |
|
1000 |
2.454 |
2.419 |
2.436 |
2.440 |
500 |
1.547 |
1.475 |
1.511 |
1.492 |
250 |
0.790 |
0.817 |
0.803 |
0.835 |
125 |
0.453 |
0.465 |
0.459 |
0.455 |
62.5 |
0.289 |
0.268 |
0.279 |
0.258 |
31.25 |
0.165 |
0.165 |
0.165 |
0.162 |
15.63 |
0.112 |
0.120 |
0.116 |
0.116 |
0 |
0.062 |
0.063 |
0.063 |
/ |
IL-2的最低检测限为3.06 pg/mL,通过使用重复检测20次零孔OD值的均值与标准差计算得出。
酶标板内精密度
3个已知浓度的样本酶标板内重复测定8次,评估酶标板内的精密度。
酶标板间精密度
3个已知浓度的样本酶标板间重复检测24次,评估酶标板间的精密度。
项目 |
板内精密度 |
板间精密度 |
||||
样本 |
1 |
2 |
3 |
1 |
2 |
3 |
8 |
8 |
8 |
24 |
24 |
24 |
|
平均值 |
400.2 |
83.6 |
18.7 |
399.0 |
83.3 |
19.2 |
标准差 |
24.6 |
4.8 |
1.3 |
37.3 |
5.2 |
2.0 |
变异系数(%) |
6.1 |
5.7 |
7.1 |
9.3 |
6.3 |
10.5 |
通过不同水平的IL-2添加于样本中来测定回收率,其回收率如下:
样本类型 |
平均回收率(%) |
范围(%) |
细胞培养上清 |
81.5 |
76.8-89.3 |
细胞培养上清稀释比例 |
平均期望值(%) |
范围(%) |
1:02 |
102.9 |
90.4-107.8 |
1:04 |
94.5 |
79.2-107.8 |
1:08 |
95.2 |
85.7-116.0 |
1:16 |
88.4 |
77.6-104.0 |
5.测定特异性
本试剂盒识别天然和重组人白介素2。下述因子进行了特异性的评估,没有观察到明显的交叉反应和干扰影响。
Recombinant human: |
Recombinant Mouse: |
|
GM-CSF |
IL-10 |
GM-CSF |
IL-1β |
IL-12 |
IL-1β |
IL-3 |
IL-17 |
IL-3 |
IL-4 |
IL-18 |
IL-4 |
IL-5 |
IL-21 |
IL-6 |
IL-6 |
TGF-β1 |
IL-10 |
IL-8 |
TNF-a |
TNF-a |
问题 |
造成原因 |
解决方法 |
标曲不好 |
移液量不准确 |
检查移液器,按时校准,仔细操作,充分混匀时盖紧管口并尽量避免泡沫。 |
稀释方法不恰当 |
||
显色值偏低 |
孵育时间太短 |
给予足够的孵育时间,样本和溶解的标准品隔夜后更换。 |
移液量不足或稀释不当 |
校准移液器和规范操作 |
|
CV偏高 |
酶标板清洗不当 |
使用正确的洗涤工序;如果使用洗板机,检查所有的端口是否堵塞。 |
受污染的洗液 |
准备新鲜洗液 |
|
灵敏度较低 |
试剂盒储存不当 |
按照产品组分表进行保存。 |