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COA
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白细胞介素 12(IL-12)，也称为自然杀伤细胞刺激因子(NKSF)或细胞毒性淋巴细胞成熟因子(CLMF)，是一种异二聚体多效性细胞因子，由 40 kDa(p40)亚基和 35 kDa(p35)亚基组成。IL-12 p40亚基由IL-23共享，IL-23是另一种异二聚体细胞因子，具有与IL-12相似和不同的生物活性。IL-12由巨噬细胞和B细胞产生，已被证明对T细胞和自然杀伤(NK)细胞有多种作用。虽然小鼠IL-12在人和小鼠细胞上都有活性，但人IL-12在小鼠细胞上没有活性。
翌圣Human IL-12 p70 ELISA(酶联免疫吸附测定)试剂盒是一种体外酶联免疫吸附测定试剂盒，用于定量测定血清、血浆和细胞培养上清中的人白介素12 p70(Human IL-12 p70)。特异性抗人白介素12 p70抗体预包被在高亲和力的酶标板上。酶标板孔中加入标准品、待测样本，经过孵育，样本中存在的人白介素12 p70与固相抗体结合。洗涤去除未结合的物质后，加入检测抗体（生物素标记）孵育结合，经洗涤，再加入酶结合物(HRP标记链霉亲和素)孵育结合。洗涤后，加入显色底物 TMB，避光显色。颜色反应的深浅与样本中人白介素12 p70的浓度成正比。加入终止液终止反应，在450 nm 主波长，570nm次波长测定吸光度值。
产品信息
|
货号 |
97025ES48 / 97025ES96 |
|
规格 |
48 T / 96 T |
|
检测范围 |
31.25-2000 pg/mL |
|
检测方法 |
双抗夹心法 |
|
检测物种 |
人 |
|
检测时长 |
5 小时 |
|
灵敏度 |
1.954 pg/mL |
|
稀释线性 |
81 - 127% |
|
回收率 |
70 - 107% |
|
板内差 |
5.0% |
|
板间差 |
8.4% |
实验数据
- 标曲数据
数据拟合绘制标准曲线，生成的标曲用于实验数据分析。
标准曲线图
|
浓度（pg/mL） |
显色值 |
平均值 |
校准值 |
||
|
2000 |
2.147 |
2.016 |
2.082 |
2.039 |
|
|
1000 |
1.311 |
1.208 |
1.260 |
1.217 |
|
|
500 |
0.732 |
0.651 |
0.691 |
0.649 |
|
|
250 |
0.441 |
0.424 |
0.433 |
0.391 |
|
|
125 |
0.220 |
0.218 |
0.219 |
0.177 |
|
|
62.5 |
0.129 |
0.128 |
0.129 |
0.086 |
|
|
31.3 |
0.089 |
0.086 |
0.087 |
0.045 |
|
|
0 |
0.043 |
0.042 |
0.042 |
/ |
|
- 灵敏度检测
人白介素12 p70的最低检测限为1.954 pg/mL，通过使用重复检测20次零孔OD值的均值与标准差计算得出。
- 精密度检测
酶标板内精密度
3个已知浓度的样本酶标板内重复测定20次，评估酶标板内的精密度。
酶标板间精密度
3个已知浓度的样本酶标板间重复检测36次，评估酶标板间的精密度。
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项目 |
板内精密度 |
板间精密度 |
||||
|
样本 |
1 |
2 |
3 |
1 |
2 |
3 |
|
20 |
20 |
20 |
36 |
36 |
36 |
|
|
平均值 |
1393.2 |
304.7 |
69.2 |
1247.7 |
304.6 |
68.2 |
|
标准差 |
68.3 |
14.0 |
3.8 |
130.8 |
30.5 |
3.1 |
|
变异系数（%） |
4.9 |
4.6 |
5.4 |
10.5 |
10.0 |
4.6 |
- 回收率检测
通过不同水平的人白介素12 p70添加于样本中来测定回收率，其回收率如下:
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样本类型 |
平均回收率(%) |
范围（%） |
|
血清 |
88.3 |
71.8-104.0 |
|
血浆 |
82.3 |
70.5-95.5 |
|
细胞培养上清 |
95.5 |
79.7-107.6 |
- 稀释线性检测
|
血清稀释比例 |
平均期望值(%) |
范围（%） |
|
1:02 |
87.7 |
85.2-92.0 |
|
1:04 |
93.8 |
89.3-99.5 |
|
1:08 |
99.7 |
89.8-109.2 |
|
1:16 |
102.8 |
86.5-117.8 |
|
血浆稀释比例 |
平均期望值(%) |
范围（%） |
|
1:02 |
91.2 |
87.8-97.2 |
|
1:04 |
106.2 |
102.2-112.5 |
|
1:08 |
115.2 |
113.7-116.9 |
|
1:16 |
123.0 |
116.1-127.1 |
|
细胞培养上清稀释比例 |
平均期望值(%) |
范围（%） |
|
1:02 |
89.9 |
81.6-103.3 |
|
1:04 |
111.2 |
98.5-118.5 |
|
1:08 |
114.8 |
108.3-121.6 |
|
1:16 |
117.8 |
111.9-123.9 |
- 样本值
应用本试剂盒，检测若干健康志愿者的样本，志愿者的用药史不详。
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样本类型 |
样本数目 |
平均值（pg/mL） |
样本值（pg/mL） |
|
血清 |
n.d. |
n.d. |
n.d. |
|
EDTA血浆 |
n.d. |
n.d. |
n.d. |
|
肝素血浆 |
n.d.-152.3 |
32 |
n.d.-152.3 |
|
枸橼酸钠血浆 |
n.d. |
n.d. |
n.d. |
|
细胞培养上清 |
n.d. |
n.d. |
n.d. |
n.d. 指样本浓度值低于检测范围内得31.25 pg/mL
- 测定特异性
本试剂盒识别天然和重组人白介素12 p70。在50 ng/mL条件下制备的下述因子进行了特异性的评估，没有观察到明显的交叉反应和干扰影响。
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Recombinant human: |
Recombinant mouse: |
|
G-CSF |
IL-6 |
|
GP130 |
IL-12/IL-23 p40 |
|
IL-6 |
IL-12 p70 |
|
IL-6 Rα |
IL-23 |
|
IL-12 p35 |
IL-27 |
|
IL-12/IL-23 p40 |
|
|
IL-12 Rβ1 |
|
|
IL-12 Rβ2 |
|
|
IL-23 |
|
|
IL-27 |
|
检测简图
疑问解答
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问题 |
造成原因 |
解决方法 |
|
标曲不好 |
移液量不准确 |
检查移液器，按时校准，仔细操作，充分混匀时盖紧管口并尽量避免泡沫。 |
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稀释方法不恰当 |
||
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显色值偏低 |
孵育时间太短 |
给予足够的孵育时间，样本和溶解的标准品隔夜后更换。 |
|
移液量不足或稀释不当 |
校准移液器和规范操作 |
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CV偏高 |
酶标板清洗不当 |
使用正确的洗涤工序；如果使用洗板机，检查所有的端口是否堵塞。 |
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受污染的洗液 |
准备新鲜洗液 |
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灵敏度较低 |
试剂盒储存不当 |
按照产品组分表进行保存。 |
Ver. CN20231208
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