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白细胞介素6（IL-6）最初被鉴定为B细胞分化因子，现在已知是一种多功能细胞因子，可调节免疫反应、造血、急性期反应和炎症，其有3个受体结合位点，包括1个特异性受体IL-6R 结合位点，和2个gp130结合位点。IL-6是一种多效性、α螺旋、22-28kDa的糖蛋白，在急性期反应、炎症、造血、骨代谢和癌症进展中发挥重要作用，人IL-6与小鼠和大鼠IL-6具有39%的aa序列同一性。它是一种多效性细胞因子，不仅影响免疫系统，还作用于其他生物系统和各种器官的许多生理事件，同时也能诱导骨髓瘤和浆细胞瘤的生长。
翌圣Human IL-6 ELISA(酶联免疫吸附测定)试剂盒是一种体外酶联免疫吸附测定试剂盒，用于定量测定血清、血浆中的人白介素6(Human IL-6)。特异性抗人白介素6抗体预包被在高亲和力的酶标板上。酶标板孔中加入标准品、待测样本，经过孵育，样本中存在的人白介素6与固相抗体结合。洗涤去除未结合的物质后，加入检测抗体孵育结合，经洗涤，再加入酶结合物(Streptavidin-HRP)孵育结合。洗涤后，加入显色底物 TMB，避光显色。颜色反应的深浅与样本中人白介素6的浓度成正比。加入终止液终止反应，在450 nm 波长(参考波长570 - 630 nm)测定吸光度值。
产品信息
|
货号 |
97068ES48 / 97068ES96 |
|
规格 |
48 T / 96 T |
|
检测范围 |
7.81-500 pg/mL |
|
检测方法 |
双抗夹心法 |
|
检测物种 |
人 |
|
检测时长 |
4.5小时 |
|
灵敏度 |
2.53 pg/mL |
|
稀释线性 |
75 - 116% |
|
回收率 |
75 - 108% |
|
板内差 |
6.1% |
|
板间差 |
7.6% |
实验数据
|
浓度（pg/mL） |
显色值 |
平均值 |
校准值 |
|
|
500 |
2.943 |
2.928 |
2.935 |
2.938 |
|
250 |
2.024 |
1.973 |
1.999 |
1.985 |
|
125 |
1.201 |
1.206 |
1.203 |
1.228 |
|
62.5 |
0.743 |
0.724 |
0.733 |
0.717 |
|
31.25 |
0.412 |
0.405 |
0.409 |
0.410 |
|
15.63 |
0.247 |
0.239 |
0.243 |
0.238 |
|
7.81 |
0.140 |
0.135 |
0.138 |
0.145 |
|
0 |
0.037 |
0.032 |
0.035 |
/ |
- 标曲数据
- 灵敏度检测
IL-6的最低检测限为2.53 pg/mL，通过使用重复检测20次零孔OD值的均值与标准差计算得出。
- 精密度检测
酶标板内精密度
3个已知浓度的样本酶标板内重复测定10次，评估酶标板内的精密度。
酶标板间精密度
3个已知浓度的样本酶标板间重复检测30次，评估酶标板间的精密度。
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项目 |
板内精密度 |
板间精密度 |
||||
|
样本 |
1 |
2 |
3 |
1 |
2 |
3 |
|
10 |
10 |
10 |
30 |
30 |
30 |
|
|
平均值 |
199.7 |
46.3 |
14.7 |
203.9 |
46.7 |
14.5 |
|
标准差 |
15.0 |
1.6 |
1.1 |
17.7 |
2.3 |
1.3 |
|
变异系数（%） |
7.5% |
3.4% |
7.3% |
8.7% |
4.9% |
9.2% |
- 回收率检测
通过不同水平的IL-6添加于样本中来测定回收率，其回收率如下:
|
样本类型 |
平均回收率(%) |
范围（%） |
|
细胞培养上清 |
94.5 |
83.2-108.8 |
|
血清 |
84.4 |
75.4-94.4 |
|
血浆 |
91.4 |
83.6-100 |
- 稀释线性检测
|
细胞培养上清稀释比例 |
平均期望值(%) |
范围（%） |
|
1:02 |
95.9 |
92.4-101.5 |
|
1:04 |
92.6 |
89.2-97.8 |
|
1:08 |
96.1 |
91.8-104.6 |
|
1:16 |
85.4 |
79-88.5 |
|
血清稀释比例 |
平均期望值(%) |
范围（%） |
|
1:02 |
93.1 |
85.5-99.6 |
|
1:04 |
99.7 |
86.3-107.1 |
|
1:08 |
98.5 |
93.1-104.2 |
|
1:16 |
88.7 |
80-98.6 |
|
血浆稀释比例 |
平均期望值(%) |
范围（%） |
|
1:02 |
97.0 |
87.7-116.4 |
|
1:04 |
104.0 |
95.5-116.8 |
|
1:08 |
102.9 |
97.5-110.6 |
|
1:16 |
87.1 |
75.3-93.7 |
- 样本值
应用本试剂盒，检测若干健康志愿者的样本，志愿者的用药史不详。
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样本类型 |
样本数目 |
平均值（pg/mL） |
样本值（pg/mL） |
|
细胞培养上清 |
8 |
n.d. |
n.d. |
|
血清 |
12 |
25.8 |
n.d.-263.4 |
|
血浆 |
8 |
22.2 |
n.d.-177.58 |
n.d. 指样本浓度值低于检测范围内得7.8 pg/mL
- 测定特异性
本试剂盒识别天然和重组人白介素6。下述因子进行了特异性的评估，没有观察到明显的交叉反应和干扰影响。
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Recombinant human: |
Recombinant Mouse: |
||
|
IL-1α |
IL-6R |
IL-1β |
|
|
IL-1β |
gp 130 |
IL-2 |
|
|
IL-2 |
LIF |
IL-4 |
|
|
IL-4 |
OSM |
IL-6 |
|
|
IL-5 |
CNTF |
IL-10 |
|
|
IL-8 |
|
IL-12 |
|
|
IL-10 |
|
|
|
|
IL-11 |
|
|
|
|
IL-12 |
|
|
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检测简图
疑问解答
|
问题 |
造成原因 |
解决方法 |
|
标曲不好 |
移液量不准确 |
检查移液器，按时校准，仔细操作，充分混匀时盖紧管口并尽量避免泡沫。 |
|
稀释方法不恰当 |
||
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显色值偏低 |
孵育时间太短 |
给予足够的孵育时间，样本和溶解的标准品隔夜后更换。 |
|
移液量不足或稀释不当 |
校准移液器和规范操作 |
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CV偏高 |
酶标板清洗不当 |
使用正确的洗涤工序；如果使用洗板机，检查所有的端口是否堵塞。 |
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受污染的洗液 |
准备新鲜洗液 |
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|
灵敏度较低 |
试剂盒储存不当 |
按照产品组分表进行保存。 |
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