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白细胞介素 12(IL-12), 也称为自然杀伤细胞刺激因子(NKSF)或细胞毒性淋巴细胞成熟因子(CLMF), 是一种异二聚体多效性细胞因子，由 40 kDa(p40)亚基和35 kDa(p35) 亚基组成。IL-12 p40亚基由IL-23共享，IL-23是另一种异二聚体细胞因子，具有与IL-12相似和不同的生物活性。IL-12由巨噬细胞和B细胞产生，已被证明对T细胞和自然杀伤（NK）细胞有多种作用。虽然小鼠IL-12在人和小鼠细胞上都有活性，但人IL-12在小鼠细胞上没有活性。
翌圣Mouse IL-12 p70 ELISA(酶联免疫吸附测定)试剂盒是一种体外酶联免疫吸附测定试剂盒，用于定量测定血清、血浆中的小鼠白介素12 p70(Mouse IL-12 p70)。特异性抗小鼠白介素12 p70抗体预包被在高亲和力的酶标板上。酶标板孔中加入标准品、待测样本，经过孵育，样本中存在的小鼠白介素12 p70与固相抗体结合。洗涤去除未结合的物质后，加入检测抗体孵育结合，经洗涤，再加入酶结合物(Streptavidin-HRP)孵育结合。洗涤后，加入显色底物 TMB，避光显色。颜色反应的深浅与样本中小鼠白介素12 p70的浓度成正比。加入终止液终止反应，在450 nm 波长(参考波长570 - 630 nm)测定吸光度值。
产品信息
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货号 |
98007ES48 / 98007ES96 |
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规格 |
48 T / 96 T |
|
检测范围 |
31.25-2000 pg/mL |
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检测方法 |
双抗夹心法 |
|
检测物种 |
小鼠 |
|
检测时长 |
4.5小时 |
|
灵敏度 |
7.19 pg/mL |
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稀释线性 |
96 - 124% |
|
回收率 |
82 - 122% |
|
板内差 |
3.2% |
|
板间差 |
4.8% |
实验数据
- 标曲数据
数据拟合绘制标准曲线，生成的标曲用于实验数据分析。
- 灵敏度检测
IL-12 p70的最低检测限为7.19 pg/mL，通过使用重复检测20次零孔OD值的均值与标准差计算得出。
- 精密度检测
酶标板内精密度
3个已知浓度的样本酶标板内重复测定10次，评估酶标板内的精密度。
酶标板间精密度
3个已知浓度的样本酶标板间重复检测30次，评估酶标板间的精密度。
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项目 |
板内精密度 |
板间精密度 |
||||
|
样本 |
1 |
2 |
3 |
1 |
2 |
3 |
|
10 |
10 |
10 |
30 |
30 |
30 |
|
|
平均值 |
960.8 |
226.7 |
51.0 |
976.8 |
228.4 |
51.4 |
|
标准差 |
43.6 |
5.2 |
1.5 |
56.9 |
8.2 |
2.6 |
|
变异系数（%） |
4.5 |
2.3 |
2.9 |
5.8 |
3.6 |
5.0 |
- 回收率检测
通过不同水平的IL-12 p70添加于样本中来测定回收率，其回收率如下:
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样本类型 |
平均回收率(%) |
范围（%） |
|
血清 |
104.3 |
95.2-117 |
|
血浆 |
91.8 |
82.3-101.6 |
|
细胞培养上清 |
109.6 |
98.5-122.4 |
- 稀释线性检测
|
血清稀释比例 |
平均期望值(%) |
范围（%） |
|
1:02 |
114.5 |
109.9-122.2 |
|
1:04 |
104.5 |
96-112.9 |
|
1:08 |
112.4 |
106.9-118.8 |
|
1:16 |
113.8 |
103.1-121.2 |
|
细胞培养上清稀释比例 |
平均期望值(%) |
范围（%） |
|
1:02 |
115.2 |
114.4-116.9 |
|
1:04 |
113.7 |
108.9-116.8 |
|
1:08 |
117.9 |
111.7-124.5 |
|
1:16 |
118.1 |
115-121.2 |
- 样本值
应用本试剂盒，检测若干正常小鼠的血清、血浆和细胞培养上清样本，数据仅供参考，结果见下表：
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样本类型 |
样本数目 |
平均值（pg/mL） |
样本值（pg/mL） |
|
血清 |
6 |
n.d. |
n.d. |
|
血浆 |
6 |
n.d. |
n.d. |
|
细胞培养上清 |
6 |
n.d. |
n.d. |
n.d. 指样本浓度值低于检测范围内得31.25 pg/mL
- 测定特异性
本试剂盒识别天然和重组小鼠白介素12 p70。下述因子进行了特异性的评估，没有观察到明显的交叉反应和干扰影响。
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Recombinant human: |
Recombinant Mouse: |
|
|
GM-CSF |
IL-6 |
IFN-γ |
|
IFN-γ |
IL-10 |
IL-1α |
|
IL-1α |
IL-12 |
IL-1β |
|
IL-1β |
IL-17A |
IL-4 |
|
IL-2 |
IL-23 |
IL-6 |
|
IL-3 |
TNF-α |
IL-10 |
|
IL-4 |
|
IL-17A |
|
IL-5 |
|
TNF-α |
检测简图
疑问解答
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问题 |
造成原因 |
解决方法 |
|
标曲不好 |
移液量不准确 |
检查移液器，按时校准，仔细操作，充分混匀时盖紧管口并尽量避免泡沫。 |
|
稀释方法不恰当 |
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显色值偏低 |
孵育时间太短 |
给予足够的孵育时间，样本和溶解的标准品隔夜后更换。 |
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移液量不足或稀释不当 |
校准移液器和规范操作 |
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CV偏高 |
酶标板清洗不当 |
使用正确的洗涤工序；如果使用洗板机，检查所有的端口是否堵塞。 |
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受污染的洗液 |
准备新鲜洗液 |
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|
灵敏度较低 |
试剂盒储存不当 |
按照产品组分表进行保存。 |
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