瘦素是一种由脂肪细胞分泌产生的蛋白质类激素，它通过抑制饥饿来帮助调节能量平衡，被称为“饥饿激素”的胃饥饿素可拮抗瘦素发挥作用。瘦素分子量为16 kDa,是由146个氨基酸残基组成的非糖基化蛋白，人瘦素与小鼠和大鼠的同源性分别为87%和84%，且人瘦素在小鼠和大鼠中可发挥生物学活性。瘦素主要产生于白色脂肪组织的脂肪细胞，也由褐色脂肪组织、胎盘、卵巢、骨骼肌、胃、乳腺上皮细胞、骨髓、胃主细胞和P/D1细胞产生。瘦素的表达情况受体内激素、细胞因子及营养状态影响,如参与正能量平衡的胰岛素和糖皮质激素可促进瘦素表达，而参与负能量平衡的儿茶酚胺则抑制瘦素的表达。在肥胖人群中，瘦素的敏感性降低，导致在能量储备高的情况下无法察觉饱腹感。

翌圣Human Leptin ELISA(酶联免疫吸附测定)试剂盒是一种体外酶联免疫吸附测定试剂盒，用于定量测定血清、血浆、细胞培养上清中的人瘦素(Human Leptin)。特异性抗人瘦素抗体预包被在高亲和力的酶标板上。酶标板孔中加入标准品、待测样本，经过孵育，样本中存在的人瘦素与固相抗体结合。洗涤去除未结合的物质后，加入检测抗体孵育结合，经洗涤，再加入酶结合物(Streptavidin-HRP)孵育结合。洗涤后，加入显色底物 TMB，避光显色。颜色反应的深浅与样本中人瘦素的浓度成正比。加入终止液终止反应，在450 nm 波长(参考波长570 - 630 nm)测定吸光度值。

 

产品信息

货号	97036ES48 / 97036ES96
规格	48 T / 96 T
检测范围	15.63-1000 pg/mL
检测方法	双抗夹心法
检测物种	人
检测时长	5小时
灵敏度	0.586 pg/mL
稀释线性	81.9 - 96.1 %
回收率	73.9 - 106.9%
板内差	2.9%
板间差	3.6%

 

实验数据

1. 标曲数据

数据拟合绘制标准曲线，生成的标曲用于实验数据分析。

标准曲线图

 

2. 灵敏度检测

人瘦素的最低检测限为0.586 pg/mL，通过使用重复检测20次零孔OD值的均值与标准差计算得出。

3. 精密度检测

酶标板内精密度

3个已知浓度的样本酶标板内重复测定20次，评估酶标板内的精密度。

酶标板间精密度

3个已知浓度的样本酶标板间重复检测30次，评估酶标板间的精密度。

项目	板内精密度			板间精密度
样本	1	2	3	1	2	3
	20	20	20	30	30	30
平均值	14.8	98.1	521.1	14.9	98.5	522.4
标准差	0.8	1.4	8.5	1.1	1.9	8.7
变异系数（%）	5.7	1.5	1.6	7.1	1.9	1.7

4. 回收率检测

  通过不同水平的人瘦素添加于样本中来测定回收率，其回收率如下:

样本类型	平均回收率(%)	范围（%）
血清	91.7	77.5-106.9
血浆	89.0	75.8-105.3
细胞培养上清	87.9	73.9-101.5

5. 稀释线性检测

血清稀释比例	平均期望值(%)	范围（%）
1:02	91.1	89.6-92.3
1:04	86.9	85.6-88.6
1:08	86.9	85.8-88.1
1:16	91.7	90.7-93.7

 

血浆稀释比例	平均期望值(%)	范围（%）
1:02	91.2	90.6-92.1
1:04	86.2	82.7-88.2
1:08	84.3	82.2-85.5
1:16	91.7	90.7-93.4

 

细胞培养上清稀释比例	平均期望值(%)	范围（%）
1:02	89.2	86.8-93.8
1:04	85.4	83.1-88.5
1:08	86.7	81.9-92.3
1:16	94.6	93.2-96.1

6. 样本

应用本试剂盒，检测若干健康志愿者的样本，志愿者的用药史不详。

样本类型	样本数目	平均值（pg/mL）	样本值（pg/mL）
血清	10	7560.0	645.8-19580.0
肝素血浆	10	9461.5	21.9-20524.6
EDTA血浆	10	11340.4	4056.9-32826.0
枸橼酸钠血浆	10	5240.5	1325.3-15307.8
细胞培养上清	10	n.d.	n.d.

n.d. 指样本浓度值低于检测范围内的15.63 pg/mL。

7. 测定特异性

本试剂盒识别天然和重组人瘦素。下述因子进行了特异性的评估，没有观察到明显的交叉反应和干扰影响。

Recombinant human:		Recombinant mouse:	Recombinant rat:
IFN-γ	IL-17A	IFN-γ	IFN-γ
IL-1β	IL-18	IL-1β	IL-1β
IL-2	IL-21	IL-2	IL-4
IL-4	IL-22	IL-4	IL-6
IL-5	IL-23	IL-6	IL-10
IL-6	MCP-1	IL-10	TNF-α
IL-8	TGF-β1	IL-17A
IL-10	TNF-α	TNF-α
IL-12	VEGF