人Fms样酪氨酸激酶3配体(FLT3L),也称为Flt-3配体,是造血的重要调节因子。其受体Flt3在髓系、淋巴系和树突状细胞祖细胞上表达,Flt3的激活突变经常在急性髓细胞白血病(AML)患者中发现,并与不良的临床预后有关。成熟的人FLT3L由一个158个氨基酸的细胞外结构域、一个细胞因子样结构域和一个近膜系链区、一个21个氨基酸的跨膜片段和一个30个氨基酸的细胞质尾部组成。人和小鼠有大约72%相同氨基酸序列,并且这两种蛋白质表现出跨物种活性。同时FLT3L可表现出抗肿瘤活性,可能是由于其募集树突细胞并引起其增殖的能力。
翌圣Human FLT3L ELISA(酶联免疫吸附测定)试剂盒是一种体外酶联免疫吸附测定试剂盒,用于定量测定血清、血浆和细胞培养上清中的FLT3L。特异性抗FLT3L抗体预包被在高亲和力的酶标板上。酶标板孔中加入标准品、待测样本,经过孵育,样本中存在的FLT3L与固相抗体结合。洗涤去除未结合的物质后,加入检测抗体孵育结合,经洗涤,再加入酶结合物(Streptavidin-HRP)孵育结合。洗涤后,加入显色底物 TMB,避光显色。颜色反应的深浅与样本中FLT3L的浓度成正比。加入终止液终止反应,在450 nm 波长(参考波长570 - 630 nm)测定吸光度值。
产品信息
货号 |
97019ES48 / 97019ES96 |
规格 |
48 T / 96 T |
检测范围 |
15.63-1000 pg/mL |
检测方法 |
双抗夹心法 |
检测时长 |
4.5小时 |
灵敏度 |
9.65 pg/mL |
稀释线性 |
75 - 125% |
回收率 |
81 - 115% |
板内差 |
5.1% |
板间差 |
8.5% |
实验数据
数据拟合绘制标准曲线,生成的标曲用于实验数据分析。
FLT3L的最低检测限为9.65 pg/mL,通过使用重复检测20次零孔OD值的均值与标准差计算得出。
酶标板内精密度
3个已知浓度的样本酶标板内重复测定8次,评估酶标板内的精密度。
酶标板间精密度
3个已知浓度的样本酶标板间重复检测24次,评估酶标板间的精密度。
项目 |
板内精密度 |
板间精密度 |
||||
样本 |
1 |
2 |
3 |
1 |
2 |
3 |
8 |
8 |
8 |
24 |
24 |
24 |
|
平均值 |
387.6 |
101.7 |
19.8 |
421.2 |
97.1 |
20.8 |
标准差 |
20.5 |
4.9 |
1.0 |
43.2 |
6.2 |
1.8 |
变异系数(%) |
5.3 |
4.9 |
5.1 |
10.3 |
6.4 |
8.9 |
通过不同水平的FLT3L添加于样本中来测定回收率,其回收率如下:
样本类型 |
平均回收率(%) |
范围(%) |
血清 |
107.2 |
95.4-113.2 |
血浆 |
104.2 |
87.2-115.3 |
细胞培养上清 |
95.7 |
81.4-109.4 |
血清稀释比例 |
平均期望值(%) |
范围(%) |
1:02 |
102.3 |
93.1-106.4 |
1:04 |
95.7 |
92.3-104.6 |
1:08 |
102.4 |
97.0-109.7 |
1:16 |
99.9 |
94.7-109.0 |
血浆稀释比例 |
平均期望值(%) |
范围(%) |
1:02 |
95.6 |
95.4-96.0 |
1:04 |
96.7 |
82.7-10.9 |
1:08 |
88.2 |
75.9-104.3 |
1:16 |
103.0 |
74.7-125.5 |
细胞培养上清稀释比例 |
平均期望值(%) |
范围(%) |
1:02 |
102.2 |
97.7-106.1 |
1:04 |
91.2 |
78.5-96.4 |
1:08 |
91.9 |
85.0-96.9 |
1:16 |
110.5 |
97.1-121.5 |
应用本试剂盒,检测若干健康志愿者的样本,志愿者的用药史不详。
样本类型 |
样本数目 |
平均值(pg/mL) |
样本值(pg/mL) |
血清 |
12 |
36.4 |
34.9-60.3 |
血浆 |
8 |
39.6 |
24.8-48 |
细胞培养上清 |
4 |
n.d. |
n.d. |
n.d. 指样本浓度值低于检测范围内得15.63 pg/mL
本试剂盒识别天然和重组FLT3L,没有观察到明显的交叉反应和干扰影响。
Recombinant human: |
EGF |
Epo |
G-CSF |
GM-CSF |
M-CSF |
HGF |
TGF-β1 |
VEGF |
疑问解答
问题 |
造成原因 |
解决方法 |
标曲不好 |
移液量不准确 |
检查移液器,按时校准,仔细操作,充分混匀时盖紧管口并尽量避免泡沫。 |
稀释方法不恰当 |
||
显色值偏低 |
孵育时间太短 |
给予足够的孵育时间,样本和溶解的标准品隔夜后更换。 |
移液量不足或稀释不当 |
校准移液器和规范操作 |
|
CV偏高 |
酶标板清洗不当 |
使用正确的洗涤工序;如果使用洗板机,检查所有的端口是否堵塞。 |
受污染的洗液 |
准备新鲜洗液 |
|
灵敏度较低 |
试剂盒储存不当 |
按照产品组分表进行保存。 |