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COA
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血管内皮生长因子（VEGF）是特异性最高的血管生成调控因子，可为内皮细胞的迁移和肿瘤细胞的转移提供形态学基础。作为肿瘤基质和毛细血管网形成的基础，VEGF可抑制肿瘤细胞的凋亡，机制尚不明确。
翌圣Mouse VEGF ELISA(酶联免疫吸附测定)试剂盒是一种体外酶联免疫吸附测定试剂盒，用于定量测定小鼠血清、血浆和细胞培养上清中的血管内皮生长因子(Mouse VEGF)。特异性抗血管内皮生长因子抗体预包被在高亲和力的酶标板上。酶标板孔中加入标准品、待测样本，经过孵育，样本中存在的血管内皮生长因子与固相抗体结合。洗涤去除未结合的物质后，加入检测抗体（生物素标记）孵育结合，经洗涤，再加入酶结合物(HRP标记链霉亲和素)孵育结合。洗涤后，加入显色底物 TMB，避光显色。颜色反应的深浅与样本中血管内皮生长因子的浓度成正比。加入终止液终止反应，在450 nm 主波长，630nm次波长测定吸光度值。
产品信息
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货号 |
98020ES48 / 98020ES96 |
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规格 |
48 T / 96 T |
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检测范围 |
6.25-400 pg/mL |
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检测方法 |
双抗夹心法 |
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检测物种 |
小鼠 |
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检测时长 |
4小时30分钟 |
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灵敏度 |
0.11 pg/mL |
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稀释线性 |
96.7-126.9% |
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回收率 |
77.1 - 124% |
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板内差 |
4.4% |
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板间差 |
6.33% |
实验数据
- 标曲数据
数据拟合绘制标准曲线，生成的标曲用于实验数据分析。标准曲线图
- 灵敏度检测
血管内皮生长因子的最低检测限为0.11 pg/mL，通过使用重复检测20次零孔OD值的均值与标准差计算得出。
- 精密度检测
酶标板内精密度
3个已知浓度的样本酶标板内重复测定20次，评估酶标板内的精密度。
酶标板间精密度
3个已知浓度的样本酶标板间重复检测36次，评估酶标板间的精密度。
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项目 |
板内精密度 |
板间精密度 |
||||
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样本 |
1 |
2 |
3 |
1 |
2 |
3 |
|
20 |
20 |
20 |
36 |
36 |
36 |
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|
平均值 |
9.35 |
41.89 |
177.21 |
9.89 |
42.80 |
179.60 |
|
标准差 |
0.36 |
1.98 |
8.26 |
0.81 |
2.70 |
8.00 |
|
变异系数（%） |
3.84 |
4.73 |
4.66 |
8.21 |
6.32 |
4.45 |
- 回收率检测
通过不同水平的血管内皮生长因子添加于样本中来测定回收率，其回收率如下:
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样本类型 |
平均回收率(%) |
范围（%） |
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血清 |
88.8 |
77.1-103.6 |
|
血浆 |
89.5 |
86.4-91.5 |
|
细胞培养上清 |
110.0 |
97.1-124.0 |
- 稀释线性检测
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血清稀释比例 |
平均期望值(%) |
范围（%） |
|
1:02 |
107.6 |
105.3-109.5 |
|
1:04 |
112.1 |
109.9-115.2 |
|
1:08 |
116.3 |
110.0-124.2 |
|
1:16 |
122.9 |
112.2-126.9 |
|
血浆稀释比例 |
平均期望值(%) |
范围（%） |
|
1:02 |
103.7 |
102.4-105 |
|
1:04 |
107.6 |
104.1-111.1 |
|
1:08 |
111.8 |
111.3-112.4 |
|
1:16 |
122.4 |
118.5-126.3 |
|
细胞培养上清稀释比例 |
平均期望值(%) |
范围（%） |
|
1:02 |
102.8 |
100.3-105.3 |
|
1:04 |
104.1 |
104.0-104.2 |
|
1:08 |
99.4 |
96.7-102.1 |
|
1:16 |
99.1 |
98.1-100.1 |
- 样本值
应用本试剂盒，检测若干样本，背景不详。
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样本类型 |
样本数目 |
平均值（pg/mL） |
样本值（pg/mL） |
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细胞培养上清 |
10 |
n.d. |
n.d. |
|
血清 |
10 |
85.20 |
58-101 |
|
血浆 |
5 |
116.80 |
98-134 |
n.d. 指样本浓度值低于检测范围内的6.25 pg/mL
- 测定特异性
本试剂盒识别天然和重组小鼠血管内皮生长因子。配制50ng/ml的下述因子进行了特异性的评估，没有观察到明显的交叉反应和干扰影响。
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Recombinant mouse: |
Recombinant human: |
Other Recombinants: |
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VEGF R2/Fc Chimera |
VEGF121 |
canine VEGF |
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VEGF165 |
feline VEGF |
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VEGF165/PIGF |
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检测简图
疑问解答
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问题 |
造成原因 |
解决方法 |
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标曲不好 |
移液量不准确 |
检查移液器，按时校准，仔细操作，充分混匀时盖紧管口并尽量避免泡沫。 |
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稀释方法不恰当 |
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显色值偏低 |
孵育时间太短 |
给予足够的孵育时间，样本和溶解的标准品隔夜后更换。 |
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移液量不足或稀释不当 |
校准移液器和规范操作 |
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CV偏高 |
酶标板清洗不当 |
使用正确的洗涤工序；如果使用洗板机，检查所有的端口是否堵塞。 |
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受污染的洗液 |
准备新鲜洗液 |
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灵敏度较低 |
试剂盒储存不当 |
按照产品组分表进行保存。 |
