人生长分化因子-15(GDF-15)又称巨噬细胞抑制性细胞因子-1(Mic-1),是转化生长因子β (TGF-β) 超家族的趋异成员。GDF-15的前体蛋白由308个氨基酸残基组成,经过酶切修饰后形成一个含有7个半胱氨酸残基的C端结构域。在人体中,GDF-15在胎盘中高表达,肾脏、胰腺和前列腺中表达水平较低。白细胞介素-1和转化生长因子-β等细胞因子可迅速诱导其表达。GDF-15具有多种生物学功能。GDF-15在肿瘤的发生和转移中也起着重要的作用,如结直肠癌、乳腺癌和前列腺癌,GDF-15的表达均有显著增加。在肿瘤进展期间,GDF-15在细胞凋亡、分化、血管生成和转移均有影响,并在成癌症期间体重减轻方面有所影响。
翌圣Human GDF-15 ELISA(酶联免疫吸附测定)试剂盒是一种体外酶联免疫吸附测定试剂盒,用于定量测定血清、血浆中的人生长分化因子15(Human GDF-15)。特异性抗人生长分化因子15抗体预包被在高亲和力的酶标板上。酶标板孔中加入标准品、待测样本,经过孵育,样本中存在的人生长分化因子15与固相抗体结合。洗涤去除未结合的物质后,加入检测抗体孵育结合,经洗涤,再加入酶结合物(Streptavidin-HRP)孵育结合。洗涤后,加入显色底物 TMB,避光显色。颜色反应的深浅与样本中人生长分化因子15的浓度成正比。加入终止液终止反应,在450 nm 波长(参考波长570 - 630 nm)测定吸光度值。
产品信息
货号 |
97021ES48 / 97021ES96 |
规格 |
48 T / 96 T |
检测范围 |
7.81-500 pg/mL |
检测方法 |
双抗夹心法 |
检测物种 |
人 |
检测时长 |
5小时 |
灵敏度 |
0.205 pg/mL |
稀释线性 |
85.7 - 105.0 % |
回收率 |
80.9 - 98.9% |
板内差 |
4.3% |
板间差 |
4.4% |
实验数据
数据拟合绘制标准曲线,生成的标曲用于实验数据分析。
标准曲线图
人生长分化因子15的最低检测限为0.205 pg/mL,通过使用重复检测20次零孔OD值的均值与标准差计算得出。
酶标板内精密度
3个已知浓度的样本酶标板内重复测定20次,评估酶标板内的精密度。
酶标板间精密度
3个已知浓度的样本酶标板间重复检测36次,评估酶标板间的精密度。
项目 |
板内精密度 |
板间精密度 |
||||
样本 |
1 |
2 |
3 |
1 |
2 |
3 |
20 |
20 |
20 |
36 |
36 |
36 |
|
平均值 |
15.0 |
59.4 |
243.0 |
14.7 |
59.7 |
246.2 |
标准差 |
0.72 |
1.86 |
12.18 |
0.80 |
2.01 |
10.84 |
变异系数(%) |
4.8 |
3.1 |
5.0 |
5.4 |
3.4 |
4.4 |
通过不同水平的人生长分化因子15添加于样本中来测定回收率,其回收率如下:
样本类型 |
平均回收率(%) |
范围(%) |
血清样本 |
92.1 |
80.9-98.9 |
血浆样本 |
91.4 |
81.5-98.6 |
血清稀释比例 |
平均期望值(%) |
范围(%) |
1:02 |
101.5 |
99.8-103.8 |
1:04 |
101.4 |
99.9-102.4 |
1:08 |
93.3 |
90.3-95.3 |
1:16 |
88.7 |
87.2-90.6 |
血浆稀释比例 |
平均期望值(%) |
范围(%) |
1:02 |
100.2 |
96.5-105.0 |
1:04 |
97.0 |
94.0-100.0 |
1:08 |
91.1 |
86.7-95.5 |
1:16 |
88.4 |
85.7-90.5 |
应用本试剂盒,检测若干健康志愿者的样本,志愿者的用药史不详。
样本类型 |
样本数目 |
平均值(pg/mL) |
样本值(pg/mL) |
血清样本 |
10 |
959.5 |
260-3114.6 |
肝素血浆 |
10 |
470.7 |
145.1-1275.8 |
EDTA血浆 |
10 |
1550.7 |
197.8-6836.5 |
枸橼酸钠血浆 |
10 |
1948.5 |
247.7-9605.4 |
本试剂盒识别天然和重组人生长分化因子15。下述因子进行了特异性的评估,没有观察到明显的交叉反应和干扰影响。
Recombinant human: |
Recombinant mouse: |
GDF-5 |
GDF-5 |
GDF-7 |
GDF-6 |
GDF-9 |
GDF-7 |
GDF-11 |
GDF-8 |
TGF-β RII/Fc |
|
TFG-β2 |
|
检测简图
疑问解答
问题 |
造成原因 |
解决方法 |
标曲不好 |
移液量不准确 |
检查移液器,按时校准,仔细操作,充分混匀时盖紧管口并尽量避免泡沫。 |
稀释方法不恰当 |
||
显色值偏低 |
孵育时间太短 |
给予足够的孵育时间,样本和溶解的标准品隔夜后更换。 |
移液量不足或稀释不当 |
校准移液器和规范操作 |
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CV偏高 |
酶标板清洗不当 |
使用正确的洗涤工序;如果使用洗板机,检查所有的端口是否堵塞。 |
受污染的洗液 |
准备新鲜洗液 |
|
灵敏度较低 |
试剂盒储存不当 |
按照产品组分表进行保存。 |