人骨成型蛋白-7 (Human BMP-7)是TGF-β超家族的成员,被认为是软骨细胞最有效的合成代谢因子之一。人BMP-7的生长因子结构域与小鼠和大鼠BMP-7具有98%的氨基酸序列同一性。BMP-7在多种器官系统中发挥作用。它促进新骨的形成和肾单位的发育,抑制前列腺上皮的分化,并拮抗上皮-间质转化。骨形态发生蛋白(BMP)信号传导调节一系列细胞过程,并在早期胚胎的模式化中发挥重要作用。已知BMP-7的表达对糖尿病肾病期间的肾损伤具有保护作用,并且在糖尿病肾病进展期早期消失。BMP7的可能临床应用还有基于其在中风动物模型中的神经保护作用。
翌圣Human BMP-7 ELISA(酶联免疫吸附测定)试剂盒是一种体外酶联免疫吸附测定试剂盒,用于定量测定血清、血浆和细胞培养上清中的BMP-7。特异性抗BMP-7抗体预包被在高亲和力的酶标板上。酶标板孔中加入标准品、待测样本,经过孵育,样本中存在的BMP-7与固相抗体结合。洗涤去除未结合的物质后,加入检测抗体孵育结合,经洗涤,再加入酶结合物(Streptavidin-HRP)孵育结合。洗涤后,加入显色底物 TMB,避光显色。颜色反应的深浅与样本中BMP-7的浓度成正比。加入终止液终止反应,在450 nm 波长(参考波长570 - 630 nm)测定吸光度值。
产品信息
货号 |
97007ES48 / 97007ES96 |
规格 |
48 T / 96 T |
检测范围 |
62.5-4000 pg/mL |
检测方法 |
双抗夹心法 |
检测时长 |
4.5小时 |
灵敏度 |
44.6 pg/mL |
稀释线性 |
86 - 127% |
回收率 |
81 - 126% |
板内差 |
3.3% |
板间差 |
4.2% |
实验数据
数据拟合绘制标准曲线,生成的标曲用于实验数据分析。标准曲线图
BMP-7的最低检测限为44.6 pg/mL,通过使用重复检测20次零孔OD值的均值与标准差计算得出。
酶标板内精密度
3个已知浓度的样本酶标板内重复测定10次,评估酶标板内的精密度。
酶标板间精密度
3个已知浓度的样本酶标板间重复检测30次,评估酶标板间的精密度。
项目 |
板内精密度 |
板间精密度 |
||||
样本 |
1 |
2 |
3 |
1 |
2 |
3 |
10 |
10 |
10 |
30 |
30 |
30 |
|
平均值 |
2004.8 |
458.1 |
115.7 |
1999.2 |
453.6 |
114.2 |
标准差 |
106.5 |
12.6 |
2.0 |
101.1 |
17.1 |
4.1 |
变异系数(%) |
5.3 |
2.7 |
1.8 |
5.1 |
3.8 |
3.6 |
通过不同水平的BMP-7添加于样本中来测定回收率,其回收率如下:
样本类型 |
平均回收率(%) |
范围(%) |
血清 |
101.3 |
86.1-126.4 |
血浆 |
103.9 |
81.8-122.1 |
细胞培养上清 |
103.6 |
89.0-126.4 |
血清稀释比例 |
平均期望值(%) |
范围(%) |
1:02 |
113.9% |
105.8-127.8 |
1:04 |
107.7% |
104.1-113.9 |
1:08 |
97.4% |
90.7-101.4 |
1:16 |
95.3% |
87.2-101.6 |
血浆稀释比例 |
平均期望值(%) |
范围(%) |
1:02 |
110.8% |
106.8-113.5 |
1:04 |
113.9% |
95.8-122.2 |
1:08 |
96.5% |
86.3-106.6 |
1:16 |
103.9% |
91.5-118.6 |
细胞培养上清稀释比例 |
平均期望值(%) |
范围(%) |
1:02 |
102.0% |
101-103.1 |
1:04 |
110.9% |
104.3-119.7 |
1:08 |
97.8% |
94.3-102.0 |
1:16 |
98.6% |
94.9-103.3 |
应用本试剂盒,检测若干健康志愿者的样本,志愿者的用药史不详。
样本类型 |
样本数目 |
平均值(pg/mL) |
样本值(pg/mL) |
血清 |
6 |
n.d. |
n.d. |
血浆 |
12 |
n.d. |
n.d. |
细胞培养上清 |
8 |
n.d. |
n.d. |
n.d. 指样本浓度值低于检测范围内得62.5 pg/mL
本试剂盒识别天然和重组BMP-7,没有观察到明显的交叉反应和干扰影响。
Recombinant human: |
BMP-2 |
BMP-3 |
BMP-4 |
BMP-5 |
BMP-6 |
TGF-β1 |
问题 |
造成原因 |
解决方法 |
标曲不好 |
移液量不准确 |
检查移液器,按时校准,仔细操作,充分混匀时盖紧管口并尽量避免泡沫。 |
稀释方法不恰当 |
||
显色值偏低 |
孵育时间太短 |
给予足够的孵育时间,样本和溶解的标准品隔夜后更换。 |
移液量不足或稀释不当 |
校准移液器和规范操作 |
|
CV偏高 |
酶标板清洗不当 |
使用正确的洗涤工序;如果使用洗板机,检查所有的端口是否堵塞。 |
受污染的洗液 |
准备新鲜洗液 |
|
灵敏度较低 |
试剂盒储存不当 |
按照产品组分表进行保存。 |