Dickkopf相关蛋白1（DKK-1）属于Dickkopf家族的成员。其成员大多具有抑制Wnt信号通路，在脊椎动物发育过程起重要作用，也与骨形成，肿瘤和阿尔兹海默症有关。DKK-1是一种分泌蛋白，其与Wnt受体LRP5/6及另一类穿膜蛋白Kremen1/2结合，形成三聚体，诱导快速的细胞内吞，减少细胞膜上的LRP5/6，由此阻断了Wnt信号向胞内的传递。DKK1的表达水平与骨髓源性抑制细胞（MDSCs）的浸润水平正相关，同时其与骨病，风湿病等的关联，使其称为临床研究的重要靶点。

翌圣Human DKK-1 ELISA(酶联免疫吸附测定)试剂盒是一种体外酶联免疫吸附测定试剂盒，用于定量测定血清、血浆和细胞培养上清中的DKK-1。特异性抗DKK-1抗体预包被在高亲和力的酶标板上。酶标板孔中加入标准品、待测样本，经过孵育，样本中存在的DKK-1与固相抗体结合。洗涤去除未结合的物质后，加入检测抗体孵育结合，经洗涤，再加入酶结合物(Streptavidin-HRP)孵育结合。洗涤后，加入显色底物 TMB，避光显色。颜色反应的深浅与样本中DKK-1的浓度成正比。加入终止液终止反应，在450 nm 波长(参考波长570 - 630 nm)测定吸光度值。

 

产品信息

货号	97014ES48 / 97014ES96
规格	48 T / 96 T
检测范围	31.25-2000 pg/mL
检测方法	双抗夹心法
检测时长	4.5小时
灵敏度	19.2 pg/mL
稀释线性	77 - 121%
回收率	77 - 122%
板内差	5.1%
板间差	6.7%

 

标曲制定

计算标准品和样本复孔的平均OD值，并减去空白孔的平均OD值作为校准OD值。以标准品浓度的对数为横坐标，校准OD值的对数为纵坐标绘制标准曲线。多种绘图和统计学软件可以用于辅助绘制标准曲线并进行未知样本浓度的计算。四参数拟合法往往拟合效果较好，其它方法如线性拟合也可能获得较好拟合结果，需要根据具体实验数据进行分析。

 

实验数据

1. 标曲数据

数据拟合绘制标准曲线，生成的标曲用于实验数据分析。

2. 灵敏度检测

DKK-1的最低检测限为19.2 pg/mL，通过使用重复检测20次零孔OD值的均值与标准差计算得出。

3. 精密度检测

酶标板内精密度

3个已知浓度的样本酶标板内重复测定6次，评估酶标板内的精密度。

酶标板间精密度

3个已知浓度的样本酶标板间重复检测30次，评估酶标板间的精密度。

项目	板内精密度			板间精密度
样本	1	2	3	1	2	3
	6	6	6	22	22	22
平均值	968.56	247.11	71.97	988.44	261.31	68.73
标准差	32.00	12.95	4.83	48.74	22.34	4.70
变异系数（%）	3.3	5.2	6.7	4.9	8.5	6.8

4. 回收率检测

 通过不同水平的DKK-1添加于样本中来测定回收率，其回收率如下:

样本类型	平均回收率(%)	范围（%）
血清	89.3	81.7-101.5
血浆	82.9	77.3-87.7
细胞培养上清	101.7	77.8-122.1

5. 稀释线性检测

血清稀释比例	平均期望值(%)	范围（%）
1:02	86.6	79.3-92.5
1:04	89.5	80.2-98.2
1:08	88.7	79.9-96.5
1:16	92.9	84.5-102.4

 

血浆稀释比例	平均期望值(%)	范围（%）
1:02	89.3	83.5-97.0
1:04	93.4	81.6-99.9
1:08	104.6	83.4-121.2
1:16	101.8	77.2-114.6

 

细胞培养上清稀释比例	平均期望值(%)	范围（%）
1:02	99.0	81.4-112.2
1:04	100.4	86.0-111.8
1:08	103.3	83.5-118.4
1:16	100.1	79.6-112.9

6. 样本值

应用本试剂盒，检测若干健康志愿者的样本，志愿者的用药史不详。

样本类型	样本数目	平均值（pg/mL）	样本值（pg/mL）
血清	10	n.d.	n.d.
血浆	8	569.8	391.5-1059.8
细胞培养上清	4	365.5	168.4-414.3

n.d. 指样本浓度值低于检测范围内得15.63 pg/mL

7. 测定特异性

本试剂盒识别天然和重组DKK-1，没有观察到明显的交叉反应和干扰影响。

Recombinant human:

Cerberus

Dkk-2

Dkk-3

Dkk-4

Kremen-1

Kremen-2

Soggy-1