产品说明书
FAQ
COA
已发表文献
BsmBI属于Type IIs型内切酶，可识别非回文序列，并在识别序列之外进行切割，常用于Golden Gate组装。本产品提供优化的反应缓冲液，可使BsmBI最大限度发挥功能，同时反应缓冲液包含重组白蛋白，可增强多种酶的稳定性。
产品组分
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组分编号 |
组分名称 |
产品规格 |
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15203-A |
BsmBI（10 U/μL） |
100 μL |
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15203-B |
10×BsmBI Buffer |
1 mL |
运输与保存方法
冰袋运输。-20°C保存，有效期2年。
识别位置
5'-CGTCTC(N)1↓-3'
3'-GCAGAG(N)5↑-5'
推荐反应条件
1×BsmBI Buffer；
55°C孵育。
失活条件
80°C孵育20 min。
注意事项
1）3 h孵育未表现星号活性，延时酶切可能出现星号活性；
2）受CpG甲基化影响，序列完全重叠，剪切受阻；
3）受EcoBI甲基化影响，序列可能重叠，剪切可能受影响；
3）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作；
4）本产品仅作科研用途！
质量控制
1. 超长时间孵育检测：最适反应温度下，将1 μL酶与1 μg λDNA共孵育3 h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解，但延长孵育时间可能出现星号活性。
2. 酶切-连接-再酶切检测：最适反应温度下，使用1 μL酶消化底物，回收酶切产物，在22°C下使用适量T4 DNA连接酶可以将酶切产物重新连接，将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。
3. DNase残留检测：将1 μL酶与双链DNA底物在37°C下孵育16 h，使用琼脂糖凝胶电泳检测，双链DNA底物无变化。
使用方法
DNA酶切流程
1）按如下建议的加样顺序配制体系反应液（冰上操作）：
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组分 |
体系 |
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10×BsmBI Buffer |
5 μL |
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底物DNA* |
1 μg |
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BsmBI（10 U/μL） |
1 μL |
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ddH2O |
up to 50 μL |
*DNA底物中应不含苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、洗涤剂或高浓度盐，否则将会影响BsmBI酶活性。
注：反应体系中加入的酶体积不应超过总体积的10%，避免酶中过多的甘油引起星号活性。
2）轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴。
3）55°C孵育15 min-1 h。一般推荐5-10 U酶/μg质粒DNA，10-20 U酶/μg基因组DNA，孵育1 h。如需过夜酶切，请将酶量调整为1 U。
4）停止反应（可选）：80°C孵育20 min即可使酶失活，或者通过吸附柱或苯酚/氯仿纯化终止反应。
5）如进行小体系反应，可参考如下反应体系配制（冰上操作）：
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组分 |
10 μL |
25 μL |
|
10×BsmBI Buffer |
1 μL |
2.5 μL |
|
底物DNA |
0.1 μg |
0.5 μg |
|
BsmBI（10 U/μL） |
1 U |
5 U |
|
ddH2O |
up to 10 μL |
up to 25 μL |
注：为避免蒸发，10 μL反应体系的孵育时间不应超过1 h。
不同DNA中的识别位点数
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λDNA |
ΦX174 |
pBR322 |
pUC57 |
pUC18/19 |
M13mp18/19 |
Adeno2 |
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14 |
0 |
1 |
2 |
2 |
1 |
21 |
甲基化修饰影响
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Dam |
Dcm |
CpG |
EcoKI |
EcoBI |
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无影响 |
无影响 |
序列完全重叠， 剪切阻断 |
无影响 |
序列可能重叠, 剪切可能受影响 |
HB221019
