产品简介

 

BsmBI属于Type IIs型内切酶，可识别非回文序列，并在识别序列之外进行切割，常用于Golden Gate组装。本产品提供优化的反应缓冲液，可使BsmBI最大限度发挥功能，同时反应缓冲液包含重组白蛋白，可增强多种酶的稳定性。

 

产品信息

 

货号	15203ES75 / 15203ES80
规格	300 U/ 1000 U
识别位置	5'-CGTCTC(N)1↓-3' 3'-GCAGAG(N)5↑-5'
推荐反应条件	1×BsmBI Buffer；55°C孵育。
酶活	10 U/μL
失活条件	80℃孵育20 min

 

组分信息

 

组分编号	组分名称	15203ES75	15203ES80
15203-A	BsmBI（10 U/μL）	30 μL	100 μL
15203-B	10×BsmBI Buffer	1 mL	1 mL

 

储存条件

 

-25～-15℃保存，有效期2年。

 

注意事项

 

1. 3 h孵育未表现星号活性，延时酶切可能出现星号活性。

2. 受CpG甲基化影响，序列完全重叠，剪切受阻。

3. 受EcoBI甲基化影响，序列可能重叠，剪切可能受影响。

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

5. 本产品仅作科研用途。

 

质量控制

 

1. 超长时间孵育检测：最适反应温度下，将1 μL酶与1 μg λDNA共孵育3 h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解，但延长孵育时间可能出现星号活性。

2. 酶切-连接-再酶切检测：最适反应温度下，使用1 μL酶消化底物，回收酶切产物，在22°C下使用适量T4 DNA连接酶可以将酶切产物重新连接，将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。

3. DNase残留检测：将1 μL酶与双链DNA底物在37°C下孵育16 h，使用琼脂糖凝胶电泳检测，双链DNA底物无变化。

 

使用方法

 

1. DNA快速酶切流程

1) 按如下建议的加样顺序配制体系反应液（冰上操作）

组分	50 μL体系
10×BsmBI Buffer	5 μL
底物DNA*	1 μg
BsmBI（10 U/μL）	1 μL
ddH2O	up to 50 μL

*DNA底物中应不含苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、洗涤剂或高浓度盐，否则将会影响BsmBI酶活性。

注：反应体系中加入的酶体积不应超过总体积的10%，避免酶中过多的甘油引起星号活性。

2）轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴。

3）55°C孵育15 min-1 h。一般推荐5-10 U酶/μg质粒DNA，10-20 U酶/μg基因组DNA，孵育1 h。如需过夜酶切，请将酶量调整为1 U。

4）停止反应（可选）：80°C孵育20 min即可使酶失活，或者通过吸附柱或苯酚/氯仿纯化终止反应。

5）如进行小体系，可参考如下反应体系（冰上操作）

组分	10 μL体系	25 μL体系
10×BsmBI Buffer	1 μL	2.5 μL
底物DNA*	0.1 μg	0.5 μg
BsmBI（10 U/μL）	1 U	5 U
ddH2O	up to 10 μL	up to 25 μL

注：为避免蒸发，10 μL反应体系的孵育时间不应超过1 h。

2. 不同DNA中的识别位点数

λDNA	ΦX174	pBR322	pUC57	pUC18/19	M13mp18/19	Adeno2
14	0	1	2	2	1	21

3. 甲基化修饰影响

Dam	Dcm	CpG	EcoKI	EcoBI
无影响	无影响	序列完全重叠，剪切阻断	无影响	序列可能重叠，剪切可能受影响

 

Ver.CN20230731