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产品描述
Hieff® Taq DNA Polymerase是嗜热性Thermus aquaticus表达的热稳定重组型DNA聚合酶，分子量为94 KD。具有5’→3’聚合酶活性和5’→3’外切酶活性，无3’→5’外切酶活性。扩增产物具有3’-dA，可直接用于TA克隆。
产品组分
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编号 |
组分 |
产品编号/规格 |
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10101ES80（1,000 U） |
10101ES92（10,000 U） |
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10101-A |
10×Taq Buffer (Mg2+ Free) |
4×1 mL |
4×10 mL |
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10101-B |
25 mM MgCl2 |
2×1 mL |
2×10 mL |
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10101-C |
Hieff® Taq DNA Polymerase (5 U/μL) |
200 μL |
2×1 mL |
产品应用
基因型鉴定、菌落PCR等常规PCR。
活性定义
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，74℃，30 min内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。
质量控制
核酸外切酶残留检测：10 U本品和0.5 μg λDNA-Hind Ⅲ，37℃下孵育4 h，DNA的电泳谱带无变化。
切口酶残留检测：10 U本品和0.5 μg IL23R质粒，37℃下孵育4 h，DNA的电泳谱带无变化。
RNase残留检测：10 U本品和0.5 μg 293T细胞总RNA，37℃下孵育1 h，RNA的电泳谱带无变化。
运输与保存方法
冰袋运输。-20℃保存，有效期2年。
注意事项
1）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
2）本产品仅作科研用途！
PCR反应体系（冰上配制）
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组分 |
体积（μL） |
终浓度 |
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ddH2O |
to 50 |
- |
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10×Taq Buffer (Mg2+ Free) |
5 |
1× |
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25 mM MgCl2 |
3 |
1.5 mM |
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dNTP Mix (10 mM each) |
1 μL |
0.2 mM |
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模板DNA |
optional |
- |
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引物1(10 μM) |
2 μL |
0.4 μM |
|
引物2(10 μM) |
2 μL |
0.4 μM |
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Hieff® Taq DNA Polymerase (5 U/μL) |
0.4 μL |
0.04 U/μL |
【注】:1）Mg2+ 终浓度：Mg2+最佳浓度为1.5-2 mM，如有需要，可0.2-0.5 mM为间隔向上摸索Mg2+最佳使用浓度。
2）聚合酶添加：室温下聚合酶有一定程度的5’-3’聚合酶活性，为了防止非特异性扩增，建议将聚合酶在最后一步加到反应体系中。
3）聚合酶浓度：推荐使用0.04 U/μL。可以在0.025-0.04 U/ μL之间进行优化。
4）不同模板的推荐使用量（50 μL反应体系）：
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模板种类 |
扩增片段 |
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基因组DNA |
50 ng-100 ng |
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质粒DNA |
10 pg-20 ng |
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cDNA |
1-5 μL（不超过反应体系的1/10） |
PCR扩增程序
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循环步骤 |
温度（ºC） |
时间 |
循环数 |
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预变性 |
94 |
30 sec-5 min |
1 |
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变性 |
94 |
30 sec |
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退火 |
50-60 |
30 sec |
35 |
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延伸 |
72 |
60 sec/kb |
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终延伸 |
72 |
10 min |
1 |
【注】: 1）预变性温度和时间：推荐使用94℃。预变性推荐时间：质粒DNA等简单模板为30 sec；cDNA、基因组DNA等复杂模板为3 min；高GC含量模板为5-10 min。
2）退火温度和时间：推荐使用60℃，也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec，可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。
3）扩增产物：请将PCR扩增产物放置于-20℃保存，防止DNA发生降解。
HB220701
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