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Hieff UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase是Hieff UNICON® Taq抗体（货号：31301ES）和Hieff® Taq DNA Polymerase（货号：10101ES）的混合产品。Hieff UNICON®Taq抗体与Hieff® Taq DNA Polymerase具有很高的亲和力，高温50℃处理30 min，依旧可以封闭Hieff® Taq DNA Polymerase的活性。本品在预变性温度下加热30 sec完全失活，释放出DNA聚合酶活性。使用该热启动Taq酶可以有效抑制引物非特异性退火导致的扩增。
Hieff UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase适用于热启动PCR和qPCR。本品中的Hieff® Taq DNA Polymerase是热稳定重组型DNA聚合酶，具有较高的模板亲和力，非常适合低拷贝模板的扩增。扩增产物具有3′-dA，可轻松克隆T载体。
产品组分
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编号 |
组分 |
产品编号/规格 |
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10729ES72 (250 U) |
10729ES76 (500 U) |
10729ES80 (1000 U) |
10729ES92 (10000 U) |
10729ES93 (25000 U) |
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10729 |
HotStart Taq DNA Polymerase (5 U/μL) |
50 μL |
100 μL |
200 μL |
1 mL×2 |
1 mL×5 |
产品应用
低拷贝基因扩增、基因型鉴定
活性定义
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，74℃，30 min内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。
运输与保存方法
冰袋运输。-20℃保存，有效期2年。
PCR反应体系（50 μL）
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组分 |
体积 (μL) |
终浓度 |
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ddH2O |
to 50 |
- |
|
2×Taq Buffer（含Mg2+、dNTP） |
25 |
1× |
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模板DNA |
X |
- |
|
Forward primer (10 μM) |
2 |
0.4 μM |
|
Reverse primer (10 μM) |
2 |
0.4 μM |
|
Hieff UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase (5 U/μL) |
0.5 |
2.5 U/50 μL |
【注】：
1）试剂使用：各组分使用前需充分融化混匀。
2）聚合酶浓度：推荐使用2.5 U/50 μL。可以在1.25-5 U/50 μL之间进行优化。
3）Mg2+终浓度：体系终浓度为2 mM。如有特殊需要，可用25 mM MgCl2，以0.2-0.5 mM为间隔向上摸索。
4）不同模板的推荐使用量（50 μL反应体系）：
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模板种类 |
模板使用量 |
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基因组DNA |
50 ng-200 ng |
|
质粒DNA |
100 pg-20 ng |
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cDNA |
1-5 μL (不超过反应体系的1/10) |
PCR扩增程序
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循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
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预变性 |
95℃ |
1 min |
1 |
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变性 |
95℃ |
10 sec |
35-40 |
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退火 |
60℃ |
20 sec |
|
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延伸 |
72℃ |
30 sec/kb |
|
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终延伸 |
72℃ |
10 min |
1 |
【注】：
1）退火温度和时间：温度推荐使用50-60℃。退火温度过低会导致非特异性扩增。引物设计参考荧光定量引物标准。推荐退火时间设置为20 sec，可以在10-30 sec内调节。
2）延伸温度和时间：温度推荐使用72℃。时间推荐使用30 sec/kb。
3）扩增产物：请将PCR扩增产物放置于-20℃保存，防止DNA发生降解。
4）扩增程序：本产品用于定量实验，可使用2步法程序扩增，去掉延伸步骤，退火和延伸合为一步，对应的时间常用30 sec或根据仪器型号设置，如Applied Biosystems 7300需用31 sec以上。
注意事项
为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
相关产品
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产品名称 |
货号 |
规格 |
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31301ES60/80/90/92/93/94 |
100 µg/ 1 mg/ 5 mg/ 10 mg/ 100 mg/ 1000 mg |
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11211ES03/09/61 |
1 mL/5 mL/100 mL |
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Hieff Unicon® V Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit |
11213ES60/80/92 |
100T/1000T /10000 T |
|
Hieff Unicon® V Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG plus) |
11214ES60/80/92 |
100T/1000T /10000 T |
HB210917
