——核酸消除的“终极武器”
翌圣生物研发团队利用一流的基因工程改造技术，研制而成的核酸去除的“终极武器”—非限制性核酸内切酶，既保证了产品的纯度与酶活，又确保了产品的稳定性，目标客户攘括工业端与科研端两大科学研究链，可满足广大生物研究者的基本需求。
翌圣核酸酶，严格把控，品质优先
1、质检项目
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货号 |
表达宿主 |
活性 |
内毒素去除 |
浓度 |
纯度SDS-PAGE |
纯度SEC-HPLC |
细菌检测 |
蛋白酶检测 |
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翌圣20125（工业） |
酵母菌 |
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翌圣20156（科研） |
大肠杆菌 |
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翌圣20157（工业） |
大肠杆菌 |
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2、质检结果
核酸内切酶超强特性
特性一：耐受性强
能够与多种细胞裂解液同时使用，如RIPA；与含有多种离子和非离子型去污剂、还原剂的蛋白提取试剂等兼容。
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试剂 |
耐受剂量 |
耐受程度 |
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盐酸胍 |
>100 mM |
完全抑制Benzonase活性 |
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EDTA |
1 mM |
部分抑制Benzonase活性 |
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5 mM |
活性丧失90% |
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PMSF |
1 mM |
不会抑制Benzonase活性 |
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Triton® X-100 |
浓度<0.4% |
保持70%的活性 |
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浓度<0.4%<1% |
活性急剧降低 |
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浓度＞1% |
活性丧失70% |
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SDS |
浓度在0.1%~1% |
活性急剧降低 |
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尿素 |
>6 M |
活性急剧降低 |
特性二：核酸内切酶操作简易，轻松使用
1、推荐使用条件
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条件参数 |
最佳条件 |
有效条件 |
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Mg2+ |
1-2 mM |
1-10 mM |
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pH |
8-9 |
6-10 |
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温度 |
37℃ |
0-42℃ |
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DTT |
0-100 mM |
>0 mM |
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巯基乙醇 |
0-100 mM |
>0 mM |
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单价阳离子 |
0-20 mM |
0-150 mM |
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磷酸根离子 |
0-10 mM |
0-100 mM |
2、推荐使用量
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实验类型 |
蛋白电泳样品 |
药物生产-1g |
疫苗、病毒生产-1L |
细胞培养-1L |
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推荐产品 |
Nuclease（科研级，20156） |
Nuclease（无内毒素级，20125，20157） |
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最低要求 |
125 U（0.5 µL） |
25 U/mL（1 µL） |
0.1 U/mL（0.4 µL） |
0.1 U/mL（0.4 µL） |
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建议用量 |
500 U（2 µL） |
250 U/mL（10 µL） |
25 U/mL（100 µL） |
5 U/mL（20 µL） |
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孵育时间 |
通常作用时间37℃在15~60 min；25℃在30~120 min； |
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注：以上仅仅是推荐，可根据实验自主摸索最优实验条件。 |
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助阵四方，应用甚广
应用1，除去生物制品中的DNA/RNA
核酸内切酶可用于疫苗、多糖、蛋白等工业生物制品中核酸的去除，使生物制品的最终核酸含量符合要求，同时提高生物制品功效。并且研究者还提供了一种可获得HIV测序文库的方案HIV-SMART，其中核酸内切酶的运用，可显著提高HIV病毒测序覆盖度，且不影响病毒核酸的回收率。
图3 （+）添加和（-）不添加核酸内切酶处理的CHU1756NGS覆盖图[1]
应用2，用于降低细胞破碎后的粘度
核酸内切酶可以降解所有形式的核酸，降低细胞裂解液的粘度，提高蛋白得率，改善分离效果，使之易于过滤（尤其是超滤），利于下游层析纯化操作。
图4 细胞裂解液Nuclease处理（A）和未处理（B）比较图
应用3，生化分析样品的制备
在ELISA、色谱分析、双相电泳和足迹分析等过程中，用核酸内切酶处理含有核酸的蛋白样品，可提高分辨率，并提高回收率。
图5 小鼠脑核蛋白Nuclease处理（A）和未处理（B）双向电泳比较图[2]
应用4，CAR-T治疗相关行业（慢病毒包装）
FAQ——如何摆脱后续核酸内切酶干扰？
措施1：采用高于1mM EDTA螯合金属离子会可逆地抑制全能核酸酶活性，极端条件会造成不可逆失活，例如100 mM NaOH，70℃处理30 min等；
措施2：对于带某种标签的Nuclease核酸内切酶可通过相应的标签蛋白纯化树脂直接去除，去除率>95%；
措施3：对于不带标签的Nuclease核酸内切酶，可通过色谱纯化去除核酸内切酶，然后可通过检测残留活性或ELISA检测来判断去除是否成功。
产品订购信息
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产品 |
货号 |
规格 |
价格（元） |
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20125ES25 |
25 KU |
1125.00 |
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20125ES50 |
50 KU |
1965.00 |
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20125ES60 |
100 KU |
3245.00 |
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20156ES25 |
25 KU |
418.00 |
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20156ES50 |
50 KU |
768.00 |
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20156ES60 |
100 KU |
1398.00 |
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20157ES25 |
25 KU |
1125.00 |
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20157ES50 |
50 KU |
1965.00 |
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20157ES60 |
100 KU |
3245.00 |
文献引用
[1] Berg M G, Yamaguchi J, Alessandri-Gradt E, et al. A pan-HIV strategy for complete genome sequencing[J]. Journal of clinical microbiology, 2016, 54(4): 868-882.
[2] Jankowska U, Latosinska A, Skupien-Rabian B, et al. Optimized procedure of extraction, purification and proteomic analysis of nuclear proteins from mouse brain[J]. Journal of neuroscience methods, 2016, 261: 1-9.
HB201214
