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产品描述
脱氧核糖核酸酶I（DNase I），即Deoxyribonuclease I，一种发现于多种细胞和组织的核酸酶，属核酸内切酶，靶向切割邻近嘧啶的磷酸二酯键，产生5’端为磷酸基团、3’端为羟基的多聚核苷酸，平均消化产物最小为多聚四核苷酸。DNase可催化多种形式DNA，如单链DNA、双链DNA，甚至染色质（其切割速率受组蛋白影响）。最佳的工作范围是pH7-8，DNase的活性依赖于Ca2+，并可被二价金属离子如Co2+，Mn2+，Zn2+等激活。5 mM Ca2+可保护酶使其不被水解。在Mg2+存在下，该酶可随机识别和切断DNA任一条链上的任意位点；而在Mn2+存在的条件下，可同时识别DNA的两条链并在几乎相同的位点进行切割。DNase I最早从胰腺中分离而来，至今哺乳动物胰腺也是该酶的最主要的来源之一。
本品来自牛胰腺，分子生物学实验中常用于清除蛋白中的DNA，或者用于向DNA中引入缺口使标记碱基插入DNA。本品以粉末形式供应，酶活力≥2000 Kunitz Units/mg蛋白。
产品性质
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CAS号（CAS NO.） |
9003-98-9 |
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分子量（Molecular Weight） |
~31 kDa |
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孔尼茨单位（Kunitz Units） |
≥2000Kunitz Units/mg protein |
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类型（Type） |
Type IV |
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最佳PH（Optimal pH） |
7～8 |
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外观（Appearance） |
白色至浅黄色粉末 |
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纯度（Purity） |
Protein: ≥80% by Biuret |
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激活剂（Activators） |
多种二价金属离子如Mg2+、Mn2+, Ca2+, Co2+, and Zn2+ |
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抑制剂（Inhibitors） |
β-巯基乙醇；螯合剂；SDS；肌动蛋白 |
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活力单位定义（Unit Definition） |
25℃，pH5.0条件下DNase催化底物DNA，使每毫升每分钟ΔA260增加0.001的变化定义为一个酶活力单位（Kunitz unit）。 |
运输和保存方法
冰袋运输。冻干粉末于-20℃保存，有效期2年。
注意事项
1）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
2）本产品仅作科研用途！
DNase Ⅰ储存溶液
20 mM sodium acetate（pH 6.5），5 mM CaCl2，0.1 mM PMSF，50%甘油。
DNase Ⅰ失活或抑制
加入EDTA至终浓度为2.5 mM后，65℃加热10 min可使DNase Ⅰ失活。酚氯仿抽提也可以使DNase I失活。金属离子螯合剂，达到毫摩尔/升浓度的锌离子，0.1%的SDS，DTT、巯基乙醇等还原剂，50-100 mM以上盐浓度均对DNase Ⅰ有显著抑制作用。
使用方法（应用于蛋白提取实验，仅供参考）
1）反应体系：蛋白提取液中按照1/100体积加入DNase I储存液（使其终浓度为20 U/mL），1/100体积加入1 M MgCl2。
2）反应条件：37℃，30-60 min。继续后续蛋白提取实验即可。
【注】：由于EDTA能螯合酶活性需要的Ca2+和Mg2+，蛋白初始裂解液中要去除EDTA，否则会降低DNase I的消化能力。
HB210721
