UltraNuclease（全能核酸酶），又称非限制性核酸内切酶、广谱核酸酶；是一种来源于Serratia Marcescen的非特异性核酸内切酶，可在链内任意核苷酸间进行切割，将核酸完全消化成2-5个碱基长度的5'-单磷酸寡核苷酸，能够在非常广泛的条件下（6 M Urea，0.1 M Guanidine HCl，0.4% Triton X-100，0.1% SDS，1 mM EDTA，1 mM PMSF）降解各种形式的（双链，单链，线状，环状，天然或变性）DNA和RNA，广泛用于去除生物制品中的核酸。

本品经基因工程改造在Escherichia coli (E. coli)中表达纯化并在GMP环境下制备，不仅可在科学研究中降低细胞上清和细胞裂解液的粘度，提高蛋白纯化效率及功能研究；还可以应用在病毒纯化、疫苗生产、蛋白和多糖类制药工业作为宿主残留核酸去除试剂，将宿主残留核酸降至皮克（pg）级别从而提高生物制品功效和安全性；并且可以有效防止细胞治疗和疫苗研究中人外周血单核细胞（PBMC）的结团。

本品以无菌液体酶的形式提供，储存于缓冲液（20 mM Tris-HCl pH 8.0，2 mM MgCl₂，20 mM NaCl，50%甘油）中，无色透明液体。

 

产品性质

来源	E. coli
分子量（Molecular Weight）	26.5 kDa
等电点	6.85
纯度（Purity）	≥ 99%（SDS-PAGE）
酶活（Enzyme Activity）	250-300 U/μL
比活（Specific Activity）	≥ 1.5×106 U/mg蛋白
最适pH（Optimum pH）	8.0（工作范围pH 6-10）
最适温度（Optimum Temperature）	37℃（工作范围0-42℃）
辅助因子（Cofactor）	1-10 mM Mg2+
蛋白酶活性（Protease）	阴性
无菌检查（Sterility）	阴性
内毒素（Endotoxin）	< 0.25 EU/1000 U
宿主蛋白残留（Host protein）	< 10 ppm（μg/mL）
储存缓冲液（Storage Buffer）	20 mM Tris-HCl pH 8.0，2 mM MgCl2，20 mM NaCl，50%甘油
活性单位定义（Unit Definition）	在37℃，pH 8.0反应条件下，2.625 mL反应体系中，在30 min内使△A260吸收值变化1.0（相当于完全消化37 μg鲑鱼精DNA成为寡核苷酸）所用的酶量定义为一个活性单位（U）。

 

运输和保存方法

干冰运输。-15℃ ~ -25℃保存，有效期2年。若是打开包装后并4℃放置超过一周，建议过滤除菌防止微生物污染。

 

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

推荐使用条件

条件参数	最佳条件	有效条件
Mg2+	1-5 mM	1-10 mM
pH	8-9	6-10
温度	37℃	0-42℃
DTT	0-100 mM	>0 mM
巯基乙醇	0-100 mM	>0 mM
单价阳离子	0-20 mM	0-150 mM
磷酸根离子	0-10 mM	0-100 mM

在最佳条件下推荐的使用量及处理时间（37℃，2mM Mg²⁺，pH 8.0）

UltraNuclease用量（终浓度）	处理时间
0.25 U/mL	> 10 h
2.5 U/mL	> 4 h
25 U/mL	30 min

 

使用方法

1、 样本准备

贴壁细胞：去除培养基，用PBS清洗细胞，去除上清。

悬浮细胞：离心收集细胞，用PBS清洗细胞，6,000 rpm 离心10 min，收集沉淀。

大肠杆菌：离心收集菌体，用PBS清洗1次，8,000 rpm 离心5 min，收集沉淀。

2、样品处理

   将收集到的细胞沉淀按照质量（g）与体积（mL）比1：(10~20) 的比例进行裂解处理，也可通过在冰上或室温通过机械或化学方法裂解细胞（1 g细胞约为10⁹个）。

3、酶的添加

1）添加适量MgCl₂将反应体系中的Mg²⁺ 浓度调整在1-5 mM范围内，将pH调整成8-9。

2）按照250 Units消化1 g细胞沉淀的比例添加UltraNuclease，37℃孵育30min以上。也可以跟据上表中的推荐使用量自行选定添加方案，在一定范围内增加酶量，消化所需时间相应减少。

【注】全能核酸酶的酶活受离子浓度、反应温度及pH等因素的影响，初次使用时建议摸索最适浓度。

4、上清获取

以12,000 rpm的转速离心30min获得细胞裂解液上清，再进行后续相关实验。

【注】若溶液为高盐溶液，偏酸性或者偏碱性，含有较高浓度的去垢剂、变性剂，应适当增加酶的用量或延长孵育时间。

HB220729