产品说明书
FAQ
COA
已发表文献
产品描述
UltraNuclease（全能核酸酶），又称非限制性核酸内切酶、广谱核酸酶；是一种来源于Serratia Marcescen的非特异性核酸内切酶，可在链内任意核苷酸间进行切割，将核酸完全消化成2-5个碱基长度的5'-单磷酸寡核苷酸，能够在非常广泛的条件下（6 M Urea，0.1 M Guanidine HCl，0.4% Triton X-100，0.1% SDS，1 mM EDTA，1 mM PMSF）降解各种形式的（双链，单链，线状，环状，天然或变性）DNA和RNA，广泛用于去除生物制品中的核酸。
本品经基因工程改造在Escherichia coli (E. coli)中表达纯化，纯度≥ 99%，可用于科学研究中降低细胞上清和细胞裂解液的粘度，提高蛋白纯化效率及功能研究，并且可以有效防止细胞治疗和疫苗研究中人外周血单核细胞（PBMC）的结团。
本品以无菌液体酶的形式提供，储存于缓冲液（20 mM Tris-HCl pH 8.0，2 mM MgCl2，20 mM NaCl，50% Glycerol）中，无色透明液体。
产品性质
|
来源 |
E. coli |
|
分子量（Molecular Weight） |
26.5 kDa |
|
等电点 |
6.85 |
|
纯度（Purity） |
≥ 99%（HPLC） |
|
酶活（Enzyme Activity） |
250-300 U/μL |
|
比活（Specific Activity） |
≥ 1.5×106 U/mg蛋白 |
|
最适pH（Optimum pH） |
8.0（工作范围pH 6-10） |
|
最适温度（Optimum Temperature） |
37℃（工作范围0-42℃） |
|
辅助因子（Cofactor） |
1-10 mM Mg2+ |
|
储存缓冲液（Storage Buffer） |
20 mM Tris-HCl pH8.0，2 mM MgCl2，20 mM NaCl，50% Glycerol |
|
活性单位定义（Unit Definition） |
在37℃，pH 8.0反应条件下，2.625 mL反应体系中，在30 min内使△A260吸收值变化1.0（相当于完全消化37 μg鲑鱼精DNA成为寡核苷酸）所用的酶量定义为一个活性单位（U）。 |
运输和保存方法
干冰运输。-15℃ ~ -25℃保存，有效期2年。
注意事项
1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）本产品仅作科研用途！
推荐使用条件
|
条件参数 |
最佳条件 |
有效条件 |
|
Mg2+ |
1-5 mM |
1-10 mM |
|
pH |
8-9 |
6-10 |
|
温度 |
37℃ |
0-42℃ |
|
DTT |
0-100 mM |
>0 mM |
|
巯基乙醇 |
0-100 mM |
>0 mM |
|
单价阳离子 |
0-20 mM |
0-150 mM |
|
磷酸根离子 |
0-10 mM |
0-100 mM |
在最佳条件下推荐的使用量及处理时间（37℃，2 mM Mg2+，pH 8.0）
|
UltraNuclease用量（终浓度） |
处理时间 |
|
0.25 U/mL |
> 10 h |
|
2.5 U/mL |
> 4 h |
|
25 U/mL |
30 min |
使用方法
1、 样本准备
贴壁细胞：去除培养基，用PBS清洗细胞，去除上清。
悬浮细胞：离心收集细胞，用PBS清洗细胞，6,000 rpm 离心10 min，收集沉淀。
大肠杆菌：离心收集菌体，用PBS清洗1次，8,000 rpm 离心5 min，收集沉淀。
2、样品处理
将收集到的细胞沉淀按照质量（g）与体积（mL）比1：(10~20) 的比例进行裂解处理，也可通过在冰上或室温通过机械或化学方法裂解细胞（1 g细胞约为109个）。
3、酶的添加
1）添加适量MgCl2将反应体系中的Mg2+ 浓度调整在1-5 mM范围内，将pH调整成8-9。
2）按照250 Units消化1 g细胞沉淀的比例添加UltraNuclease，37℃孵育30min以上。也可以跟据上表中的推荐使用量自行选定添加方案，在一定范围内增加酶量，消化所需时间相应减少。
【注】全能核酸酶的酶活受离子浓度、反应温度及pH等因素的影响，初次使用时建议摸索最适浓度。
4、上清获取
以12,000 rpm的转速离心30min获得细胞裂解液上清，再进行后续相关实验。
【注】若溶液为高盐溶液，偏酸性或者偏碱性，含有较高浓度的去垢剂、变性剂，应适当增加酶的用量或延长孵育时间。
HB220729
