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COA
已发表文献
热敏UDG（尿嘧啶-DNA糖基化酶）能催化水解含有尿嘧啶的DNA链的尿嘧啶碱基和糖磷酸骨架的N-糖苷键，释放游离尿嘧啶。热敏UDG酶与普通UDG酶相比，避免了常规UDG酶灭活后可能存在的残留活性在常温下对含dU扩增产物的降解作用。本产品在室温下起作用，且对温度敏感、易于灭活。
产品组分
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编号 |
组分名称 |
产品编号/规格 |
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|
10303ES60 (100 U) |
10303ES76 (500 U) |
10303ES96 (10,000 U) |
10303ES97 (100 mL) |
10303ES98 (500 mL) |
||
|
10303 |
Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), heat-labile, 1 U/μL |
100 μL |
500 μL |
10 mL |
100 mL |
500 mL |
产品应用
1. 去除含dU的PCR产物气溶胶污染。
2. 去除单链或双链DNA尿嘧啶碱基。
酶活定义
以25℃，30 min内完全降解1 μg含有尿嘧啶的dsDNA所需酶量定义为1个活性单位（U）。
失活方式
50℃，10 min。
运输储存方法
干冰运输。-20℃保存，有效期2年。
注意事项
1. 热敏UDG在多数PCR反应缓冲液中均有活性；
2. 酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存；
3. 本产品仅做科研用途；
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
应用实例
1. 按下列体系配制PCR反应液：
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组分 |
体积（μL） |
终浓度 |
|
10×PCR Buffer (Mg2+ Plus) |
5 |
1× |
|
25 mM MgCl2 |
3 |
1.5 mM |
|
dUTP (10 mM) |
3 |
0.6 mM |
|
dCTP / dGTP/ dATP/ dTTP (10 mM each) |
1 |
0.2 mM each |
|
模板DNA |
Optional |
- |
|
引物1 (10 μM) |
2 |
0.4 μM |
|
引物2 (10 μM) |
2 |
0.4 μM |
|
Taq DNA Polymerase (5 U/μL) |
0.5 |
0.05 U/μL |
|
Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), heat-labile, 1 U/μL |
1 |
1 U/50 μL |
|
ddH2O |
Up to 50 |
【注】：根据实验需要，dUTP终浓度可在0.2-0.6 mM 之间调整。可选择性掺入0.2 mM dTTP。
2. PCR反应：
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反应温度 |
反应时间 |
循环数 |
目的 |
|
25℃ |
10 min |
1 |
降解含U模板 |
|
94℃ |
2 min |
1 |
UDG酶失活，模板预变性 |
|
95℃ |
10 sec |
30-35 |
变性 |
|
60℃ |
20 sec |
退火 |
|
|
72℃ |
30 sec/kb |
延伸 |
|
|
72℃ |
5 min |
1 |
终延伸 |
【注】：25℃反应时间可以根据实验需要在5-10 min内调整。
HB220930
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