推荐应用
UDG(尿嘧啶-DNA 糖基化酶)能催化水解含有尿嘧啶的DNA链的尿嘧啶碱基和糖磷酸骨架的N-糖苷键,释放游离尿嘧啶。
1. 去除含dU的PCR产物气溶胶污染。
2. 去除单链或双链DNA尿嘧啶碱基。
酶活定义
以25℃,30 min内完全降解1 μg含有尿嘧啶的dsDNA所需酶量定义为1个活性单位(U)。
失活方式
95℃,5-10 min。
按下列组份配制PCR反应液:
| 试剂 | 体积 |
| 10×PCR Buffer (Mg2+ Plus) | 5 μL |
| 25 mmol/L MgCl2 | 3 μL |
| dUTP | 0.6 mmol/L |
| dCTP / dGTP/ dATP | 0.2 mmol/L each |
| 模板DNA | Optional |
| 引物1 (10 μmol/L) | 2 μL |
| 引物2 (10 μmol/L) | 2 μL |
| Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 0.5 μL |
| UDG (1 U/μL) | 1 μL |
| ddH2O | To 50 μL |
【注】:根据实验需要,dUTP终浓度可在0.2-0.6 mmol/L之间调整。可选择性掺入0.2 mmol/L dTTP。
2. PCR反应:
| 反应温度 | 反应时间 | 循环数 | 目的 |
| 25℃ | 10 min | 1 | 降解含U模板 |
| 94℃ | 2 min | 1 | UDG酶失活,模板预变性 |
| 95℃ | 10 sec | 30-35 | 变性 |
| 60℃ | 20 sec | 退火 | |
| 72℃ | 30 sec/kb | 延伸 | |
| 72℃ | 5 min | 1 | 终延伸 |
【注】:25℃反应时间可以根据实验需要在5-10 min内调整。
2~8℃保存,有效期6个月。
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