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COA
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热敏UDG（尿嘧啶-DNA 糖基化酶）能催化水解含有尿嘧啶的DNA链的尿嘧啶碱基和糖磷酸骨架的N-糖苷键，释放游离尿嘧啶。热敏UDG酶与普通UDG酶相比，避免了常规UDG酶灭活后可能存在的残留活性在常温下对含dU扩增产物的降解作用。本产品在室温下起作用，且对温度敏感、易于灭活。
产品组分
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编号 |
组分 |
产品编号/规格 |
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10707ES60 (100 U) |
10707ES76 (500 U) |
10707ES90 (5 KU) |
10707ES92 (10 KU) |
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10707 |
Uracil DNA Glycosylase (UDG), Heat-Labile (1 U/μL) |
100 μL |
500 μL |
5 mL |
10 mL |
产品应用
1. 去除含dU的PCR产物气溶胶污染。
2. 去除单链或双链DNA尿嘧啶碱基。
酶活定义
以25℃，30 min内完全降解1 μg含有尿嘧啶的dsDNA所需酶量定义为1个活性单位 (U)。
失活方式
94℃，2-5 min。
运输储存方法
冰袋运输。4℃保存，有效期1年。
注意事项
1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2. 热敏UDG在多数PCR反应缓冲液中均有活性。
应用实例
1. 按下列组份配制PCR反应液：
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试剂 |
体积 |
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10×PCR Buffer (Mg2+ Plus) |
5 μL |
|
25 mmol/L MgCl2 |
3 μL |
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dUTP |
0.6 mmol/L |
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dCTP / dGTP/ dATP |
0.2 mmol/L each |
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模板DNA |
Optional |
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引物1 (10 μmol/L) |
2 μL |
|
引物2 (10 μmol/L) |
2 μL |
|
Taq DNA Polymerase (5 U/μL) |
0.5 μL |
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Heat-Labile UDG (1 U/μL) |
1 μL |
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ddH2O |
To 50 μL |
【注】：根据实验需要，dUTP终浓度可在0.2-0.6 mmol/L之间调整。可选择性掺入0.2 mmol/L dTTP。
2. PCR反应：
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反应温度 |
反应时间 |
循环数 |
目的 |
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25℃ |
10 min |
1 |
降解含U模板 |
|
94℃ |
2 min |
1 |
UDG酶失活，模板预变性 |
|
95℃ |
10 sec |
30-35 |
变性 |
|
60℃ |
20 sec |
退火 |
|
|
72℃ |
30 sec/kb |
延伸 |
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|
72℃ |
5 min |
1 |
终延伸 |
【注】：25℃反应时间可以根据实验需要在5-10 min内调整。
相关产品
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产品定位 |
产品名称 |
产品货号 |
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dUTP |
10128ES |
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鼠源RNase抑制剂 |
10603ES |
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10703ES |
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逆转录酶 |
Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase, 600 U/μL |
13158ES |
|
11300ES |
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|
热启动Taq酶 |
10718ES |
|
|
Hieff UNICON® Hotstart E-Taq DNA Polymerase, 5 U/μL |
10726ES |
|
|
Hieff Unicon® Hotstart J-Taq DNA Polymerase, 6 U/μL, Glycerol-free |
13705ES |
HB220916
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