近年来，随着相关技术指导与监管体系的日益完善，细胞与基因治疗(Cell and Gene Therapy, CGT)发展迅速，大量CGT产品进入临床试验，生物技术公司也争相布局CGT产业。

CGT产品的主要形式包括基因治疗载体、溶瘤病毒产品、细胞产品（eg.CAR-T、NK细胞）等，治疗策略包括体内和体外，常用的载体包括非病毒类的聚合物胶束、脂质体颗粒、质粒等以及病毒类的慢病毒（LV）、腺病毒（AdV）、腺相关病毒（AAV）、逆转录病毒等。

已知，基于动物细胞的表达平台能够生产复杂的生物分子，如重组蛋白和病毒载体。其中，大多数治疗性生物分子药物都是在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中生产的。然而，鼠源细胞与人源的HEK293细胞相比，缺乏人的细胞翻译后修饰系统，因此与人源系统表达的蛋白有差异。所以，一些重组蛋白在HEK293中生产效果更好，且大多数治疗性病毒载体也是在HEK293中产生的。

自2015年以来，FDA已经批准了7种HEK衍生产品，其中有6种是细胞和基因疗法产品，且HEK293细胞系或其衍生物被用于生产病毒载体。随着CGT疗领域的不断发展，HEK293及其衍生细胞在病毒载体生产中的应用也将越来越广泛。

HEK293细胞系等用于慢病毒和腺相关病毒等的生产，在病毒载体生产工艺中，不仅会不可避免的产生宿主细胞残留DNA和RNA杂质，还会产生SV40大T抗原（LTA）残留DNA、E1A和E1B残留DNA等杂质。这些杂质不仅会降低病毒载体相关药物的有效性，还可能带来传染性或致瘤性等安全问题。因此，各国的监管机构都对生物制品中残余DNA的含量进行了严格管控。

SV40LTA&E1A概念及法规监管要求

HEK293细胞系是通过用剪切的人腺病毒5型DNA片段（即腺病毒E1A和E1B基因）转化人胚胎肾细胞而建立的。与此同时，HEK293亚型和衍生物也被建立起来，详细信息如下图：

HEK293T就是HEK293细胞系衍生物之一，通过表达一个温度敏感的SV40大T抗原突变体而建立的，即转染了一个SV40大T抗原(LTA)质粒。SV40 LTA质粒含有SV40复制起始点和CMV启动子区，且SV40（猴空泡病毒40）是在人类和猴子中都发现的致瘤病毒。

CDE（国家药品监督管理局药品审评中心）最新颁布的2022年5月的《体内基因治疗产品药学研究与评价技术指导原则（试行）》和《体外基因修饰系统药学研究与评价技术指导原则（试行）》中都提到包装病毒载体用细胞库，如HEK293T细胞，对其携带的具有潜在安全性风险的Adv E1A序列和SV40大T抗原序列，均应进行残留控制。

SV40LTA&E1A残留DNA的检测

《中国药典》2020年版三部通则3407规定，宿主细胞DNA残留量检测方法为DNA探针杂交法、荧光染色法和定量PCR法。这些宿主细胞残留DNA的检测方法，同样适用于宿主细胞中具有潜在安全性风险的特定转化序列（eg.SV40LTA、E1A）的检测。

由于定量PCR法相比于其他两种方法，具有极高的灵敏度、序列特异性和准确性，可为生物制药工业在工艺研究和成品质量控制方面提供可靠的检测手段，所以定量PCR法现已成为各生物制品厂家首选检测方法。

针对上述情况，翌圣生物自主研发了SV40LTA&E1A残留DNA检测试剂盒，采用qPCR法分别特异性扩增E1A序列和SV40 LTA序列，专一快速的检测包装病毒载体用细胞库，如HEK293T细胞，来源的SV40LTA和E1A残留DNA含量。还研发了与之配套使用的宿主细胞残留DNA样本前处理试剂盒，以及配套的自动化核酸提取仪器。

下图就SV40LTA&E1A残留DNA检测工作流程，进行了详细介绍：

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产品性能：

符合法规：按照法规要求进行全面验证，可提供验证报告；

保障品质：试剂盒原材料全自主研发，qPCR Mix等酶产品在超洁净酶工厂生产；

灵敏度高：定量限可达101copies/μL水平；

精密度高：批内重复性高，批间差异小；

专属性强：特异性检测SV40LTA和E1A残留DNA，不受其他外源基因组DNA干扰；

防干扰强：添加内部对照（IC），便于排除样本干扰、反应配制异常等因素。

产品信息

产品名称	货号	规格
MolPure® Magnetic Residual DNA Sample Preparation Kit 磁珠法残留DNA样本前处理试剂盒(瓶装)	18461ES	25T/100T
MolPure® Mag32 Residual DNA Sample Preparation Kit FA 磁珠法残留DNA样本前处理试剂盒FA(预封装)	18462ES59	2×16 T/ 6×16T
Auto-Pure 32A automated nucleic acid extraction system Auto-Pure 32A 全自动核酸提取仪	80501ES01	32通量
SV40LTA&E1A Residue DNA Detection Kit SV40LTA&E1A 残留 DNA 检测试剂盒	41310ES	50T/100T

参考文献

[1] Magdalena Malm.Evolution from adherent to suspension:systems biology of HEK293 cell line development [J].Scientifc Reports,(2020) 10:18996.

[2] EvanTan，Cara Sze Hui Chin，Zhi Feng Sherman Lim，Say Kong Ng.HEK293 Cell Line as a Platform to Produce Recombinant Proteins and Viral Vectors.Front Bioeng Biotechnol.2021 Dec 13;9:796991.

福利大放送

翌圣为您提供MolPure®磁珠法残留 DNA 样本前处理试剂盒（货号18461ES25)和SV40LTA&E1A残留DNA检测试剂盒（货号41310ES50）试用装，每个客户限申请1套（即2种试剂盒各1盒），总量限购20盒（最终解释权归翌圣生物所有）。

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