Protein A、Protein G、Protein L背景介绍
Protein A、Protein G是最常应用于抗体亲和纯化和免疫沉淀的蛋白。将Protein A、G分别固定在不同的介质上,或同时将Protein A、G共价偶联到介质表面,是从腹水、细胞培养物上清和血清中分离IgG和IgG亚家族的有效工具。
Protein A和Protein G纯化IgG和IgG亚家族的基础是二者对IgG-类型的多克隆抗体和单克隆抗体具有很高的特异性亲和力。
Protein L源于细菌,能更广泛地结合各种类型以及亚类的免疫球蛋白,包括所有类型的IgG和单链可变区(ScFv)以及Fab片段。该蛋白只与抗体的kappa链结合而不会影响抗体的抗原结合位点,这一特性使其与蛋白A或蛋白G相比,能更广泛地结合各种来源及亚类的抗体。
表1. Protein A、G、L的抗体亲和性差异分析
Protein A |
Protein G |
Protein A/G |
Protein L |
|
优点 |
结合能力强; 有5个结构域与IgG的Fc片段结合
|
结合能力强; 有2个结构域与IgG的Fc和Fab片段结合
|
结合范围更广,兼容A\G共同点;结合能力更强; 实用性更高
|
几乎可以结合所有的Ig类(IgG,IgM,IgA,IgE和IgD); 还可以结合单个轻链(Scfv)和Fab片段
|
缺点 |
宿主细胞蛋白的一些非特异性结合 |
不能像Protein A一样耐受苛刻的洗脱条件 |
不结合牛、山羊或绵羊来源的免疫球蛋白 |
附表1是关于Protein A和Protein G对于不同的免疫球蛋白相对结合力的比较,可用于预测Protein A或Protein G作为亲和介质时的选用指导。对于来自特别物种IgG的最佳结合条件,应该查阅近期的文献,获得最有价值的信息。
翌圣抗体亲和纯化产品选择指南
亲和纯化是一种具有可逆反应的生化分离纯化技术,如抗原与抗体。适用于从成分复杂且杂质含量远大于目标物的混合物中提纯目标物。如图2所示,首先填料与介质偶联,结合形成具有特异亲和性的分离介质,再向柱子中注入样本,配体选择性的吸附目标物质,平衡液洗杂,最终用洗脱液将目标物质进行洗脱。
翌圣抗体亲和纯化类产品,以基因改造后的Protein A、Protein G、Protein A/G、Protein L为原料,通过不同化学方法将其定向、高效的偶联到琼脂糖基质上或磁珠表面,不仅降低了蛋白的非特异性结合、实现了介质较高的抗体载量,同时也获得了适用于不同纯化要求的抗体纯化产品,涵盖不同类型填料树脂、自动层析预装柱、免疫磁珠,方便使用手动或自动化方式纯化抗体蛋白质。
翌圣抗体纯化产品选购指南
产品系列 |
纯化树脂系列 |
预装柱系列 |
免疫磁珠系列 |
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产品货号 |
36401ES、36403ES、36405ES、36408ES |
36409ES/36410ES/36413ES-36416ES |
36417ES-36420ES |
|
产品名称 |
耐碱rProtein A Agarose Resin |
rProtein A/G、rProtein G、rProtein L Agarose Resin |
rProtein A、rProtein G、rProtein L 4FF Chromatography Column, 1 mL / 5 mL |
Protein A/G、Protein A、Protein G、Protein L MagBeads (IP Grade) |
配基 |
耐碱重组 Protein A |
重组Protein A/G、Protein G、Protein L |
重组Protein A、Protein G、Protein L |
重组Protein A/G、Protein A、Protein G、Protein L |
载量 |
Protein A > 40mg人IgG/mL |
Protein A/G > 0.7 mg人IgG/mL磁珠 Protein L > 0.5 mg人IgG/mL磁珠 |
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基质 |
高度交联4%琼脂糖微球 |
硅基磁珠 |
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平均粒径 |
45-165µm |
200 nm |
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优势 |
非特异性结合低,高载量 |
柱效稳定,高载量,高流速,强稳定性, 标准接口适配商品化各类中压色谱系统 |
高纯度,高载量,高特异性, 配套磁力架使用方便 |
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推荐应用 |
任意规模抗体纯化 |
小规模抗体纯化 |
抗体纯化,重组蛋白纯化,IP,COIP |
产品性能
FAQ
常见问题 |
原因分析 |
推荐解决方案 |
柱子反压过高 |
筛板堵塞 |
清洗或更换筛板 |
填料堵塞 |
参照说明书树脂清洗 |
|
裂解液中含有微小的固体颗粒,建议上柱前使用滤膜 (0.22或0.45 μm)过滤,或者离心去除 |
||
样品纯化过程中 曲线不稳定 |
样品或Buffer中含气泡 |
去除样品或柱子中的气泡 |
样品和buffer进行脱气 |
||
洗脱组分中 没有目的蛋白 |
样品中抗体浓度太低 |
适当提、高抗体浓度 |
抗体被降解 |
蛋白洗脱后应立即中和,适当提高洗脱液pH |
|
样本与纯化介质柱不匹配 |
参照表1选择合适的纯化介质 |
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电泳loading buffer DTT失效 |
使用新鲜配制loading buffer |
|
洗脱缓冲液pH不对 |
依次用pH3.0, pH 2.5, pH 2.0洗脱,电泳检测产物 |
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结合缓冲液pH不对 |
应保证样本和结合缓冲液pH在7.0 |
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回收率逐渐降低 |
上样量过多 |
减少上样量 |
柱子太脏,载量降低 |
参照说明书进行树脂清洗 |
|
样本中脂蛋白、酚红、 小分子污染物等的去除 |
每毫升样品中加入0.04mL硫酸右旋葡糖酐和1mL 1M CaCl2沉淀脂蛋白,离心除去 |
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PVP加入样品中至终浓度为3%沉淀b-脂蛋白和球蛋白,离心去除 |
||
结合缓冲液稀释样本 |
||
脱盐柱除去酚红 |
||
分级沉淀法去除低分子污染物,可采用硫酸铵沉淀,羊脂酸沉淀等方法 |
||
抗体药物纯化过程中,降低聚集体含量 |
在上游细胞培养,控制最佳的收获时机,避免培养过程中抗体聚集 |
|
低pH洗脱液中,加入保护剂(Arg等) |
||
低pH洗脱后,快速中和 |
||
适当降低亲和层析柱进样量 |
||
样品处理和纯化过程中,保持低温(4-8℃) |
产品信息
产品名称 |
货号 |
规格 |
目录价/元 |
耐碱rProtein A Agarose Resin 耐碱重组Protein A琼脂糖纯化树脂 |
5 mL /25 mL/ 100 mL |
900/2800/ 9500 |
|
rProtein A/G Agarose Resin Protein A/G琼脂糖纯化树脂 |
1 mL /2 mL/ 5 mL/25 mL/ 100 mL |
278/538/878/2886/7426 |
|
rProtein G Agarose Resin Protein G琼脂糖纯化树脂 |
5 mL /25 mL/ 100 mL/ |
546/2186/ 7426 |
|
rProtein L Agarose Resin 4FF Protein L琼脂糖快速纯化树脂 |
5 mL /25 mL/ 100 mL/ |
2868/13288/27688 |
|
rProtein A 4FF Chromatography Column, 1 mL 蛋白A纯化预装柱, 1 mL |
1 mL/ 5x1 mL |
528/2218 |
|
rProtein A 4FF Chromatography Column, 5 mL 蛋白A纯化预装柱, 5 mL |
5 mL/ 5x5 mL |
1848/6838 |
|
rProtein G 4FF Chromatography Column, 1 mL 蛋白G纯化预装柱, 1 mL |
1 mL/ 5x1 mL |
528/2218 |
|
rProtein G 4FF Chromatography Column, 5 mL 蛋白G纯化预装柱,5 mL |
5 mL/ 5x5 mL |
1848/6838 |
|
rProtein L 4FF Chromatography Column, 1 mL 蛋白L纯化预装柱, 1 mL |
1 mL/ 5x1 mL |
938/3748 |
|
rProtein L 4FF Chromatography Column, 5 mL 蛋白L纯化预装柱, 5 mL |
5 mL/ 5x5 mL |
3528/14088 |
|
Protein A/G MagBeads (IP Grade) 蛋白A/G免疫磁珠 |
1 mL/5 mL |
787/2937 |
|
rProtein A MagBeads (IP Grade) 蛋白A免疫磁珠 |
1 mL/5 mL |
995/3225 |
|
rProtein G MagBeads (IP Grade) 蛋白G免疫磁珠 |
1 mL/5 mL |
995/3225 |
|
rProtein L MagBeads (IP Grade) 蛋白L免疫磁珠 |
1 mL/5 mL |
1595/5665 |
相关产品订购
产品名称 |
货号 |
规格 |
目录价/元 |
rProtein A/G IP/Co-IP Kit 蛋白A/G免疫(共)沉淀试剂盒 |
40T |
1595 |
参考文献
[1] Shi W, Li W, Zhang J, et al. One-step synthesis of site-specific antibody-drug conjugates by reprograming IgG glycoengineering with LacNAc-based substrates. Acta Pharm Sin B. 2022;12(5):2417-2428. doi:10.1016/j.apsb.2021.12.013(IF:11.614)
[2] Chen LJ, Zhang NN, Zhou CX, et al. Gm364 coordinates MIB2/DLL3/Notch2 to regulate female fertility through AKT activation. Cell Death Differ. 2022;29(2):366-380. doi:10.1038/s41418-021-00861-5(IF:15.828)
[3] Zhang K, Chen S, Yang Q, et al. The Oligodendrocyte Transcription Factor 2 OLIG2 regulates transcriptional repression during myelinogenesis in rodents [published correction appears in Nat Commun. 2022 Jun 1;13(1):3164]. Nat Commun. 2022;13(1):1423. Published 2022 Mar 17.
doi:10.1038/s41467-022-29068-z(IF:14.919)
[4] Tu Q, Liu X, Yao X, et al. RETSAT associates with DDX39B to promote fork restarting and resistance to gemcitabine based chemotherapy in pancreatic ductal adenocarcinoma. J Exp Clin Cancer Res. 2022;41(1):274. Published 2022 Sep 15. doi:10.1186/s13046-022-02490-3(IF:12.658)
[5] Zhang C, Wang Y, Zhu Y, et al. Development and structural basis of a two-MAb cocktail for treating SARS-CoV-2 infections. Nat Commun. 2021;12(1):264. Published 2021 Jan 11. doi:10.1038/s41467-020-20465-w(IF:14.919)
[6] Zhang C, Xu C, Dai W, et al. Functional and structural characterization of a two-MAb cocktail for delayed treatment of enterovirus D68 infections. Nat Commun. 2021;12(1):2904. Published 2021 May 18. doi:10.1038/s41467-021-23199-5(IF:14.919)
[7] Wu RQ, Lao XM, et al. Immune checkpoint therapy-elicited sialylation of IgG antibodies impairs antitumorigenic type I interferon responses in hepatocellular carcinoma. immuni. 2022.11.014. Epub 2022 Dec 22. Immunity. doi: 10.1016/j.(IF:43.474)
附表1. 蛋白A、G对不同物种Ig的结合能力比较
免疫球蛋白亚型 |
Protein A |
Protein G |
免疫球蛋白亚型 |
Protein A |
Protein G |
Human IgG |
++++ |
++++ |
Mouse IgG |
++++ |
++++ |
Human IgG1 |
++++ |
++++ |
Mouse IgG1 |
+ |
++++ |
Human IgG2 |
++++ |
++++ |
Mouse IgG2a |
++++ |
++++ |
Human IgG3 |
+ |
++++ |
Mouse IgG2b |
+++ |
+++ |
Human IgG4 |
++++ |
++++ |
Mouse IgG3 |
++ |
+++ |
Human IgM |
Use anti-Human IgM |
Mouse IgM |
Use anti-Mouse IgM |
||
Human IgE |
NR |
NR |
Chicken IgG (IgY) |
NR |
NR |
Human IgA |
+ |
NR |
Cow IgG |
++ |
++++ |
Human IgA1 |
+ |
NR |
Goat IgG |
+ |
++ |
Human IgA2 |
+ |
NR |
Goat IgG1 |
+ |
++++ |
Human IgD |
Use anti-Human IgD |
Goat IgG2 |
++++ |
++++ |
|
Rat IgG |
+ |
++ |
Goat IgM |
NR |
NR |
Rat IgG1 |
NR |
+ |
Guinea Pig IgG |
++++ |
++ |
Rat IgG2a |
NR |
NR |
Guinea Pig IgG1 |
++++ |
++ |
Rat IgG2b |
NR |
+ |
Guinea Pig IgG2 |
++++ |
++ |
Rat IgG3 |
+ |
++ |
Hamster IgG |
+ |
++ |
Sheep IgG |
+ |
++ |
Horse IgG |
++ |
++++ |
Sheep IgG1 |
+ |
++ |
Rabbit IgG |
++++ |
+++ |
Sheep IgG2 |
+ |
++ |
Rabbit IgM |
NR |
NR |
Sheep IgM |
NR |
NR |
Rabbit All isotypes |
+++ |
++ |
Pig IgG |
+++ |
+++ |
Monkey IgG |
++++ |
++++ |
Cat IgG |
++++ |
+ |
Donkey IgG |
++ |
++++ |
Dog IgG |
++ |
+ |
|
|
|
(+)= weak binding; (++)= moderate binding; (++++)= strong binding; NR= not recommended; (-)= not tested; |