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抗体亲和纯化系列

Protein A、Protein G、Protein L背景介绍

Protein A、Protein G是最常应用于抗体亲和纯化和免疫沉淀的蛋白。将Protein A、G分别固定在不同的介质上,或同时将Protein A、G共价偶联到介质表面,是从腹水、细胞培养物上清和血清中分离IgG和IgG亚家族的有效工具。

 

Protein A和Protein G纯化IgG和IgG亚家族的基础是二者对IgG-类型的多克隆抗体和单克隆抗体具有很高的特异性亲和力。

 

 

Protein L源于细菌,能更广泛地结合各种类型以及亚类的免疫球蛋白,包括所有类型的IgG和单链可变区(ScFv)以及Fab片段。该蛋白只与抗体的kappa链结合而不会影响抗体的抗原结合位点,这一特性使其与蛋白A或蛋白G相比,能更广泛地结合各种来源及亚类的抗体。

 

表1. Protein A、G、L的抗体亲和性差异分析

 

Protein A

Protein G

Protein A/G

Protein L

优点

结合能力强;

5个结构域与IgG的Fc片段结合

 

结合能力强;

2个结构域与IgG的Fc和Fab片段结合

 

结合范围更广,兼容A\G共同点;结合能力更强;

实用性更高

 

几乎可以结合所有的Ig类(IgG,IgM,IgA,IgE和IgD);

还可以结合单个轻链(Scfv)和Fab片段

 

缺点

宿主细胞蛋白的一些非特异性结合

不能像Protein A一样耐受苛刻的洗脱条件

 

不结合牛、山羊或绵羊来源的免疫球蛋白

 

附表1是关于Protein A和Protein G对于不同的免疫球蛋白相对结合力的比较,可用于预测Protein A或Protein G作为亲和介质时的选用指导。对于来自特别物种IgG的最佳结合条件,应该查阅近期的文献,获得最有价值的信息。

 

翌圣抗体亲和纯化产品选择指南

亲和纯化是一种具有可逆反应的生化分离纯化技术,如抗原与抗体。适用于从成分复杂且杂质含量远大于目标物的混合物中提纯目标物。如图2所示,首先填料与介质偶联,结合形成具有特异亲和性的分离介质,再向柱子中注入样本,配体选择性的吸附目标物质,平衡液洗杂,最终用洗脱液将目标物质进行洗脱。

 

 

翌圣抗体亲和纯化类产品,以基因改造后的Protein A、Protein G、Protein A/G、Protein L为原料,通过不同化学方法将其定向、高效的偶联到琼脂糖基质上或磁珠表面,不仅降低了蛋白的非特异性结合、实现了介质较高的抗体载量,同时也获得了适用于不同纯化要求的抗体纯化产品,涵盖不同类型填料树脂、自动层析预装柱、免疫磁珠,方便使用手动或自动化方式纯化抗体蛋白质。

 

翌圣抗体纯化产品选购指南

产品系列

纯化树脂系列

预装柱系列

免疫磁珠系列

产品货号

36401ES、36403ES、36405ES、36408ES

36409ES/36410ES/36413ES-36416ES

36417ES-36420ES

产品名称

耐碱rProtein A Agarose Resin

rProtein A/GrProtein G、rProtein L Agarose Resin

rProtein A、rProtein G、rProtein L 4FF

Chromatography Column, 1 mL / 5 mL

Protein A/G、Protein A、Protein G、Protein L MagBeads (IP Grade)

配基

耐碱重组 

Protein A

重组Protein A/G、Protein G、Protein L

重组Protein A、Protein G、Protein L

重组Protein A/G、Protein A、Protein G、Protein L

载量

Protein A > 40mg人IgG/mL
Protein G > 30mg人IgG/mL
Protein A/G > 20mg人IgG/mL
Protein L > 15mg人IgG/mL

Protein A/G > 0.7 mg人IgG/mL磁珠
Protein A > 0.9 mg人IgG/mL磁珠
Protein G > 0.85 mg人IgG/mL磁珠

 Protein L > 0.5 mg人IgG/mL磁珠

基质

高度交联4%琼脂糖微球

硅基磁珠

平均粒径

45-165µm

200 nm

优势

非特异性结合低,高载量

柱效稳定,高载量,高流速,强稳定性,

标准接口适配商品化各类中压色谱系统

高纯度,高载量,高特异性,

配套磁力架使用方便

推荐应用

任意规模抗体纯化

小规模抗体纯化

抗体纯化,重组蛋白纯化,IP,COIP

 

产品性能

 

FAQ

常见问题

原因分析

推荐解决方案

柱子反压过高

筛板堵塞

清洗或更换筛板

填料堵塞

参照说明书树脂清洗

裂解液中含有微小的固体颗粒,建议上柱前使用滤膜 (0.22或0.45 μm)过滤,或者离心去除

样品纯化过程中

曲线不稳定

样品或Buffer中含气泡

去除样品或柱子中的气泡

样品和buffer进行脱气

洗脱组分中

没有目的蛋白

样品中抗体浓度太低

适当提、高抗体浓度

抗体被降解

蛋白洗脱后应立即中和,适当提高洗脱液pH

样本与纯化介质柱不匹配 

参照表1选择合适的纯化介质

电泳loading buffer DTT失效

使用新鲜配制loading buffer

洗脱缓冲液pH不对

依次用pH3.0, pH 2.5, pH 2.0洗脱,电泳检测产物

结合缓冲液pH不对

应保证样本和结合缓冲液pH在7.0

回收率逐渐降低

上样量过多

减少上样量

柱子太脏,载量降低

参照说明书进行树脂清洗

样本中脂蛋白、酚红、

小分子污染物等的去除

每毫升样品中加入0.04mL硫酸右旋葡糖酐和1mL 1M CaCl2沉淀脂蛋白,离心除去

PVP加入样品中至终浓度为3%沉淀b-脂蛋白和球蛋白,离心去除

结合缓冲液稀释样本

脱盐柱除去酚红

分级沉淀法去除低分子污染物,可采用硫酸铵沉淀,羊脂酸沉淀等方法

抗体药物纯化过程中,降低聚集体含量

在上游细胞培养,控制最佳的收获时机,避免培养过程中抗体聚集

pH洗脱液中,加入保护剂(Arg等)

pH洗脱后,快速中和

适当降低亲和层析柱进样量

样品处理和纯化过程中,保持低温(4-8℃)

 

产品信息

产品名称

货号

规格

目录价/元

耐碱rProtein A Agarose Resin

耐碱重组Protein A琼脂糖纯化树脂

36401ES08/25/60

5 mL /25 mL/

100 mL

900/2800/

9500

rProtein A/G Agarose Resin

Protein A/G琼脂糖纯化树脂

36403ES03/05/08/25/60

1 mL /2 mL/

5 mL/25 mL/

100 mL

278/538/878/2886/7426

rProtein G Agarose Resin

Protein G琼脂糖纯化树脂

36405ES08/25/60

5 mL /25 mL/

100 mL/

546/2186/

7426

rProtein L Agarose Resin 4FF

Protein L琼脂糖快速纯化树脂

36408ES08/25/60

5 mL /25 mL/

100 mL/

2868/13288/27688

rProtein A 4FF Chromatography Column, 1 mL

蛋白A纯化预装柱, 1 mL

36409ES03/08

1 mL/

5x1 mL

528/2218

rProtein A 4FF Chromatography Column, 5 mL

蛋白A纯化预装柱, 5 mL

36410ES08/25

5 mL/

5x5 mL

1848/6838

rProtein G 4FF Chromatography Column, 1 mL

蛋白G纯化预装柱, 1 mL

36413ES03/08

1 mL/

5x1 mL

528/2218

rProtein G 4FF Chromatography Column, 5 mL

蛋白G纯化预装柱,5 mL

36414ES08/25

5 mL/

5x5 mL

1848/6838

rProtein L 4FF Chromatography Column, 1 mL

蛋白L纯化预装柱, 1 mL

36415ES03/08

1 mL/

5x1 mL

938/3748

rProtein L 4FF Chromatography Column, 5 mL

蛋白L纯化预装柱, 5 mL

36416ES08/25

5 mL/

5x5 mL

3528/14088

Protein A/G MagBeads (IP Grade)

蛋白A/G免疫磁珠

36417ES03/08

1 mL/5 mL

787/2937

rProtein A MagBeads (IP Grade)

蛋白A免疫磁珠

36418ES03/08

1 mL/5 mL

995/3225

rProtein G MagBeads (IP Grade)

蛋白G免疫磁珠

36419ES03/08

1 mL/5 mL

995/3225

rProtein L MagBeads (IP Grade)

蛋白L免疫磁珠

36420ES03/08

1 mL/5 mL

1595/5665

 

相关产品订购

产品名称

货号

规格

目录价/元

rProtein A/G IP/Co-IP Kit

蛋白A/G免疫(共)沉淀试剂盒

36421ES40

40T

1595

 

参考文献

[1] Shi W, Li W, Zhang J, et al. One-step synthesis of site-specific antibody-drug conjugates by reprograming IgG glycoengineering with LacNAc-based substrates. Acta Pharm Sin B. 2022;12(5):2417-2428. doi:10.1016/j.apsb.2021.12.013(IF:11.614)

[2] Chen LJ, Zhang NN, Zhou CX, et al. Gm364 coordinates MIB2/DLL3/Notch2 to regulate female fertility through AKT activation. Cell Death Differ. 2022;29(2):366-380. doi:10.1038/s41418-021-00861-5(IF:15.828)

[3] Zhang K, Chen S, Yang Q, et al. The Oligodendrocyte Transcription Factor 2 OLIG2 regulates transcriptional repression during myelinogenesis in rodents [published correction appears in Nat Commun. 2022 Jun 1;13(1):3164]. Nat Commun. 2022;13(1):1423. Published 2022 Mar 17.   

doi:10.1038/s41467-022-29068-z(IF:14.919)

[4] Tu Q, Liu X, Yao X, et al. RETSAT associates with DDX39B to promote fork restarting and resistance to gemcitabine based chemotherapy in pancreatic ductal adenocarcinoma. J Exp Clin Cancer Res. 2022;41(1):274. Published 2022 Sep 15. doi:10.1186/s13046-022-02490-3(IF:12.658)

[5] Zhang C, Wang Y, Zhu Y, et al. Development and structural basis of a two-MAb cocktail for treating SARS-CoV-2 infections. Nat Commun. 2021;12(1):264. Published 2021 Jan 11. doi:10.1038/s41467-020-20465-w(IF:14.919)

[6] Zhang C, Xu C, Dai W, et al. Functional and structural characterization of a two-MAb cocktail for delayed treatment of enterovirus D68 infections. Nat Commun. 2021;12(1):2904. Published 2021 May 18. doi:10.1038/s41467-021-23199-5(IF:14.919)

[7] Wu RQ, Lao XM, et al. Immune checkpoint therapy-elicited sialylation of IgG antibodies impairs antitumorigenic type I interferon responses in hepatocellular carcinoma. immuni. 2022.11.014. Epub 2022 Dec 22. Immunity. doi: 10.1016/j.(IF:43.474)

 

1. 蛋白AG对不同物种Ig的结合能力比较

免疫球蛋白亚型

Protein A

Protein G  

免疫球蛋白亚型

Protein A

Protein G  

Human IgG

++++

++++

Mouse IgG

++++

++++

Human IgG1

++++

++++

Mouse IgG1

+

++++

Human IgG2

++++

++++

Mouse IgG2a

++++

++++

Human IgG3

+

++++

Mouse IgG2b

+++

+++

Human IgG4

++++

++++

Mouse IgG3

++

+++

Human IgM

Use anti-Human IgM

Mouse IgM

Use anti-Mouse IgM

Human IgE

NR

NR

Chicken IgG (IgY)

NR

NR

Human IgA

+

NR

Cow IgG

++

++++

Human IgA1

+

NR

Goat IgG

+

++

Human IgA2

+

NR

Goat IgG1

+

++++

Human IgD

Use anti-Human IgD

Goat IgG2

++++

++++

Rat IgG

+

++

Goat IgM

NR

NR

Rat IgG1

NR

+

Guinea Pig IgG

++++

++

Rat IgG2a

NR

NR

Guinea Pig IgG1

++++

++

Rat IgG2b

NR

+

Guinea Pig IgG2

++++

++

Rat IgG3

+

++

Hamster IgG

+

++

Sheep IgG

+

++

Horse IgG

++

++++

Sheep IgG1

+

++

Rabbit IgG

++++

+++

Sheep IgG2

+

++

Rabbit IgM

NR

NR

Sheep IgM

NR

NR

Rabbit All isotypes

+++

++

Pig IgG

+++

+++

Monkey IgG

++++

++++

Cat IgG

++++

+

Donkey IgG

++

++++

Dog IgG

++

+

 

 

 

(+)= weak binding; (++)= moderate binding; (++++)= strong binding; NR= not recommended; (-)= not tested;

400-6111-883