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Strep标签蛋白纯化攻略

Strep标签发展史

生物素化蛋白

生物素化 (Biotinylation) 是将生物素以共价键连接到分子 (如氨基酸或蛋白质) 上的过程。由于生物素很小,生物素化通常快速且具有特异性,不易干扰分子固有功能。

生物素与链霉亲和素(Streptavidin)具有极高的亲和力、快速性和高特异性,因此,生物素化被广泛应用于生物医学领域,生物素化蛋白作为一种分子工具广泛用于生物技术。

 

Strep-tag蛋白

Strep标签 (Trp-Arg-His-Pro-Gln-Phe-Gly-Gly)是能与链霉亲和素特异性结合的一种亲和标签。与生物素相比,Strep标签和链霉亲和素间的亲和力较低,因此可以使用生物素衍生物(Diaminobiotin),进行在生理条件下的温和洗脱。但Strep标签仅能接在目标蛋白的C端,对于需将标签接在N端或是蛋白内部的实验,非常的不实用。

 

Strep-tagⅡ蛋白

经过进一步的优化后,得到了现在被广泛使用的Strep-tag Ⅱ (Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys)。Streptactin作为优化后的链霉亲和素,Streptactin:Strep-tag Ⅱ的亲和力较Streptavidin:Strep-tag Ⅱ提升了近100倍,这个改变使得洗脱时需改用脱硫生物素(Desthiobiotin) ,但过程一样温合。Strep-tag Ⅱ逐渐被广泛应用于纯化或检测蛋白质中,还甚至发展出细胞分离检测的方法。

 

Twin-Strep-tag蛋白

研究者们利用总结合力(Avidity)的原理,将两个Strep-tag Ⅱ以linker连接在一起,称作: Twin-Strep-tag Ⅱ。这一新标签的出现再度提升了目标蛋白与Streptactin的链接强度,改善了低浓度样本纯化效果,还能于捕捉蛋白复合体、检测蛋白间的相互作用。

 

产品简介

1  Streptavidin and Streptactin Agarose Resin 对比

填料名称

Streptavidin Agarose Resin 6FF

Streptactin Agarose Resin 4FF

基质

高度交联的6%琼脂糖微球

高度交联的4%琼脂糖微球

粒径

45-165 µm

配体

Streptavidin

Streptactin

载量/mL基质

200 nmoL Biotin

3-5 mg Twin Strep-tag 蛋白

产品应用

1、生物素或生物素化物质的纯化, 如固定生物素化抗体纯化抗原,或固定生物素化蛋白纯化抗体。

2、亚氨基生物素标签物质的纯化。

1、Strep-Tag Ⅱ标签蛋白纯化;

2、Twin Strep-Tag Ⅱ 标签蛋白纯化。

优点

1、链霉亲和素对生物素的结合能力与亲和素相当,但非特异性吸附远低于亲和素。

2、链霉亲和素对亚氨基生物素的亲和力相对较弱, 可以在非变性的条件下洗脱。

1、纯化过程温和、目的蛋白纯度高、特异性强、兼容多种表达系统,对于有挑战性蛋白的纯化十分有帮助。

2、使用脱硫生物素作为洗脱液,1 mM HABA或0.1 M NaOH再生前后载量变化较小,可再生10次左右。

缺点

1、链酶亲和素与生物素结合非常牢固,只有将这些物质变性后才能从填料上洗脱下来。一般可不断开链霉亲和素和生物素的结合,0.1 M 甘氨酸(pH 3.0)断开抗原抗体结合。

1、使用D-生物素作为洗脱液,无法用HABA完全竞争取代,高浓度氢氧化钠(1 M)清洗后载量只能达到初始载量的50%左右,对填料损害较大

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

2 翌圣Strep-Tag Ⅱ纯化产品选购指南

产品货号

20495ES

20494ES/20496ES

英文名称

Streptactin Agarose Resin 4FF

Streptactin 4FF Chromatography Column,

1 mL / 5 mL

中文名称

Strep(Ⅱ)标签蛋白琼脂糖纯化树脂

Strep(Ⅱ)标签蛋白纯化预装柱,1 mL/5 mL

基质

高度交联的4%琼脂糖微球

高度交联的4%琼脂糖微球

配体

Streptactin

Streptactin

最大流速

300 cm/h

300 cm/h

载量

3-5 mg Twin Strep-tag 蛋白/mL基质

3-5 mg Twin Strep-tag 蛋白/mL基质

应用

适合孵育法、重力柱小量纯化,推荐实验室规模客户使用。

也可搭配蛋白纯化仪用于工业大规模蛋白的纯化,更容易放大规模

预装柱具有标准接口,可以适配商品化的各类中压色谱系统,

ÄKTA等,方便客户操作

 

产品测试

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1  Streptactin Agarose Resin 4FF纯化strep tag Ⅱ跑胶图

1:marker;2:样品;3:流出液;4:洗脱液

纯度>98%

 

产品信息

 

产品名称

产品编号

规格

目录价/元

Streptactin Agarose Resin 4FF

Strep(Ⅱ)标签蛋白琼脂糖纯化树脂

20495ES08/25/

60

5 mL/25 mL/

100 mL

1585/6365/16995

Streptactin 4FF Chromatography Column, 1 mL

Strep(Ⅱ)标签蛋白纯化预装柱, 1 mL

20494ES03/08

1 mL/5×1 mL

585/2285

Streptactin 4FF Chromatography Column, 5 mL

Strep(Ⅱ)标签蛋白纯化预装柱, 5 mL

20496ES08/25

5 mL/5×5 mL

1985/7485

D-脱硫生物素

60164ES60/76

100 mg/500 mg

495/1995

Streptavidin Agarose Resin 6FF 

链霉亲和素琼脂糖纯化树脂

20512ES08/25/

60

5 mL/ 5×5 mL/ 100 mL

1586/6356/16796

BiotSep Streptavidin 6FF Chromatography Column, 1 mL 

生物素分子纯化预装柱,1 mL

20513ES03/08

1 mL/5×1 mL

428/1328

BiotSep Streptavidin 6FF Chromatography Column, 5 mL 

生物素分子纯化预装柱,5 mL

20514ES08/25

5 mL/5×5 mL

1158/4958

Streptavidin (SAV) MagBeads 

链霉亲和素(SAV)免疫磁珠

47503ES03/08

1 mL/5×1 mL

728/3058

 

400-6111-883