产品简介

 

Anti-Flag亲和纯化凝胶（20584ES）由高质量的鼠源IgG2b单克隆抗体与4%高度交联的琼脂糖凝胶通过供价偶联制备，本产品具有较高的Flag标签融合蛋白加载容量（至少为1.1 mg protein/mL凝胶），杂蛋白非特异结合少，可用于带有Flag标签的融合蛋白免疫沉淀（IP）和纯化。

Anti-DYKDDDDK (Flag) Affinity Gel（Anti-Flag亲和纯化凝胶）可结合Met修饰的N端Flag融合蛋白（Met-FLAG–Protein），N端Flag融合蛋白（FLAG–Protein），C端Flag融合蛋白（Protein-FLAG）。

 

 

产品性能

 

高特异性：选用高质量的鼠源IgG2b单克隆抗体，能够特异性吸附Flag蛋白序列。

高收率，高纯度：得到高纯度的Flag标签蛋白

高结合载量：载量≥1.1mg蛋白/mL凝胶

结合蛋白类型多：Met-FLAG-Protein，N端FLAG-Protein，C端FLAG-Protein

用途广泛：可用于蛋白质纯化或IP

 

 

数据展示

 

1）产品性能验证：Anti-Flag亲和纯化凝胶(20584ES)纯化原核表达的Met修饰的N端Flag融合蛋白，N端Flag融合蛋白，C端Flag融合蛋白。

 图1.Yeasen Anti-Flag亲和纯化凝胶纯化结果跑胶图

a：Flag-N    b：Flag-M    c：Flag-C

M：蛋白Marker;1：发酵菌破碎上清原液；2：发酵菌破碎上清柱后穿透；3：洗脱（pH2.7洗脱1）；4：洗脱（pH2.7洗脱2）；5：洗脱（pH2.7洗脱3）；6：洗脱（pH2.7洗脱4）；7：纯化后凝胶（pH2.7洗脱）；8：洗脱（pH12洗脱1）；9：洗脱（pH12洗脱2）；10：洗脱（pH12洗脱3）；11：洗脱（pH12洗脱4）；12：纯化后凝胶（pH12洗脱）

 

2）翌圣Anti-Flag亲和纯化凝胶(20584ES)与国外进口品牌S*纯化对比测试。

图2.Yeasen（a) PK进口品牌S*(b)Anti-Flag凝胶对比测试跑胶图

M：蛋白Marker；1：Flag-N蛋白柱前原液；2：Flag-N蛋白柱后穿透；3：洗脱（pH2.7洗脱）；4：洗脱（pH12洗脱）

 

图3.Yeasen（a) PK进口品牌S*(b)Anti-Flag凝胶每ml凝胶纯化蛋白得率对比测试结果

 

结论：与国外竞品sigma对品,20584ES的载量和目的蛋白得率均明显高于竞品。

 

3）翌圣Anti-Flag亲和纯化凝胶(20584ES)与品牌G*纯化低表达量蛋白对比测试。

图4.Yeasen Anti-Flag亲和纯化凝胶纯化低表达量蛋白结果跑胶图

a：Flag-N    b：Flag-M    c：Flag-C

M：蛋白Marker；1：Flag-C蛋白柱前原液；2：Flag-C蛋白柱后穿透；3：洗脱（pH2.7洗脱）；4：洗脱（pH12洗脱）5：洗脱（1×Flag多肽洗脱）;6：纯化后凝胶（pH2.7洗脱）；7：纯化后凝胶（pH12洗脱）；8：纯化后凝胶（1×Flag多肽洗脱）

 

图5.Yeasen（a) PK品牌G*(c)Anti-Flag凝胶对比测试跑胶图

M：蛋白Marker；1：Flag-C蛋白柱前原液；2：Flag-C蛋白柱后穿透；3：洗脱（pH2.7洗脱）；4：洗脱（pH12洗脱）5：洗脱（1×Flag多肽洗脱）;6：纯化后凝胶（pH2.7洗脱）；7：纯化后凝胶（pH12洗脱）；8：纯化后凝胶（1×Flag多肽洗脱）

 

结论：在目的蛋白表达量极低的条件下，我们凝胶得到的目的蛋白纯度明显优于竞品。

 

 

 

常见问题

 

问题	可能原因	推荐解决方案
柱子反压过高	填料被堵塞	清洗树脂。
		裂解液中含有微小的固体颗粒，建议上样前最好用0.22µm或0.45µm滤膜过滤，或离心去除。
	样品太黏稠	样品中含高浓度的核酸，延长破碎时间直至粘度降低，或添加DNaseI （终浓度为5µg/ml），Mg2+(终浓度1mM)，冰上孵育10-15min
	缓冲液太黏稠	有机试剂或蛋白稳定试剂（如甘油等）可能会引起反压增高，降低操作流速。
洗脱组分中无目的蛋白	Flag标签蛋白变性了	过度的裂解使目的蛋白变性使用温和的裂解条件，实验条件以经验为准。
	洗脱方式不合适	建议更换洗脱方式，优先选择1×flag多肽竞争洗脱。
	目的蛋白聚集产生沉淀	在细胞裂解前溶液中加入DTT，终浓度为1-10mM
	融合蛋白改变了Flag的构象，影响了目的蛋白的结合力	测定pGEX中Flag的结合力，对载体进行超声处理，检测其结合力。如果载体中Flag有很高的亲和力，有可能是改变融合蛋白的构象从而降低了Flag标签蛋白的亲和力。
		降低结合温度至4℃，充分清洗。
目的蛋白没有完全洗脱下来	洗脱体积太少	增加洗脱液体积，减小洗脱流速。
	洗脱液中Gly-HCl的pH 发生改变	使用新鲜配制的洗脱液
	洗脱液孵育时间不够	增加洗脱液与凝胶的孵育时间
电泳或western blot检测中发现多条带	Flag融合蛋白已经发生降解	在裂解液中加入蛋白酶抑制剂，如加入1 mM PMSF
		可能是蛋白酶对目的蛋白部分降解造成的，可使用蛋白酶缺陷型宿主菌（如lon-或ompT）
	细胞破碎过度	减少细胞破碎时间，超声前加入溶菌酶（菌液体积的0.1倍10mg/ml溶菌酶，25mM Tris-HCl，pH8.0），避免发泡导致蛋白酶变性，过度超声破碎增加宿主内源蛋白与Flag融合目的蛋白的共纯化。
	抗体与E. coli的各种蛋白反应	抗体吸附E. coli蛋白：Flag-抗体；超声处理去除Flag抗体，可以用Western Blot检测

 

 

 

订货信息

 

产品名称	产品编号	规格(mL)
Anti-DYKDDDDK (Flag) Affinity Gel（Anti-Flag亲和纯化凝胶）	20584ES03/08/25/60	1/5/25/100
Anti-HA Affinity Gel（Anti-HA亲和纯化凝胶）	20586ES03/08/25/60	1/5/25/100
Anti-Myc Affinity Gel（Anti-Myc标签亲和纯化凝胶）	20587ES03/08/25/60	1/5/25/100
Anti-V5 Affinity Gel（Anti-V5标签亲和纯化凝胶）	20588ES03/08/25/60	1/5/25/100
Anti-His Affinity Gel（Anti-His标签亲和纯化凝胶）	20589ES03/08/25/60	1/5/25/100
Anti-GFP MagBeads（Anti-GFP免疫磁珠)	20564ES03/08	1/5
Anti-DYKDDDDK (Flag) MagBeads Anti-flag免疫磁珠	20565ES03/08	1/5
Anti-HA MagBeads（Anti-HA免疫磁珠）	20566ES03/08	1/5
Anti-Myc MagBeads（Anti-Myc免疫磁珠）	20567ES03/08	1/5