——Protein A /G 琼脂糖或磁珠
产品介绍
Protein A、Protein G是最常应用于抗体亲和纯化和免疫沉淀的蛋白。 Protein A/G琼脂糖或磁珠将Protein A、G共价偶联到介质表面，具有结合能力更强、结合范围更广、实用性更高的特点。
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Protein A/G 4FF Agarose |
Protein A/G MagBeads |
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基质 |
高度交联4%琼脂糖微球 |
聚合物磁性微球 |
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填料粒径 |
45-165 µm |
1 µm |
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载量 |
>20 mg 人IgG/mL |
>50 µg 人IgG/mg |
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优势 |
简单易用，无需辅助设备 |
操作简单 |
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孔径大，结合力强 |
直径小，动力学好 |
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靶蛋白获取量高 |
表面光滑，beads吸附很少，背景低，抗体消耗少 |
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缺点 |
多孔易吸附（需要做pre-clear) |
配套磁力架使用方便 |
产品应用
1.纯化抗体：一步纯化即可从血清或腹水样品中分离出高纯度的抗体。
2.免疫沉淀（immunoprecipitation，IP）：通过对某蛋白质的富集，研究该蛋白的特性（如翻译后修饰等）。
3.免疫共沉淀Co-IP(co-Immunoprecipitation)：通过对某蛋白质的富集，研究与其结合的其他蛋白（即蛋白-蛋白相互作用、蛋白复合物等）。
操作流程
实用案例
1、Protein A/G 4FF Agarose纯化兔血清中的抗体。
图1 Protein A/G 4FF Agarose纯化抗体结果电泳图
2、Protein A/G 4FF Agarose用于COIP: 针对p65和细胞周期蛋白依赖性激酶9（CDK9）的特异性抗体对提取的总细胞蛋白进行免疫沉淀分析。
Fig 2. Immunoprecipitants were then subjected to western blot analysis using specific antibodies against CDK9 and p65.
常见问题
1、Co-IP背景较深或有杂带？
① 固相基质的非特异性结合，对琼脂糖微球做pre clear或者更换磁珠。
② 抗体结合非特异的蛋白，可设置对照排除非特异性条带。
③ 洗涤不当造成杂带，可优化缓冲液。
2、靶蛋白为什么没有条带？
① 没有添加抑制剂或裂解液不合适，导致蛋白构象改变不能结合或者降解。
② 饵蛋白较难洗脱，换成高强度的洗脱缓冲液。
③ 选用的抗体不合适，建议IP验证过的抗体，并优化下抗体用量。
④ 蛋白间为弱相互作用，或者相互作用依赖翻译后修饰。
3、Input条带清晰，
① 饵蛋白X和靶蛋白Y的相互作用本身比较弱。
② 饵蛋白X并不是靶蛋白Y的唯一，只部分Y与X互作；可以尝试反向拉，比如用Y去拉X，可能效果比较好。
4、我的蛋白和抗体重链分子量很接近，怎样减少抗体干扰？
① IP/WB一抗使用不同种属来源，选择与IP抗体种属无交叉反应的二抗。
② 特殊二抗：比如仅识别重链或者轻链的二抗，或者仅识别天然抗体的二抗。
③ 直接源头遏制：将抗体交联到固相基质或protein A/G上，避免洗脱干扰。
5、琼脂糖难离心，容易吸上来一点，怎么办？
① 使用带滤膜的离心柱，下部有接样管，琼脂糖完全截留在滤膜上
② 换成磁珠
6、我的目的蛋白因为没有对应的特异性抗体而无法进行免疫沉淀，怎么办？
① 若此蛋白带标签，可选择针对此蛋白的标签抗体来进行免疫沉淀。
订购信息
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产品名称 |
货号 |
规格（mL） |
价格（元） |
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36403ES03/05/08/25/60 |
1/2/5/25/100 |
278/538/878/2886/7426 |
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36404ES08/25/60 |
5 /25 /100 |
978/3186/8726 |
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36417ES03/08 |
1/5 |
787/2937 |
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36402ES08/25/60 |
5 /25 /100 |
866/2656/8856 |
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36405ES08/25/60 |
5 /25 /100 |
546/2186/7426 |
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36406ES08/25/60 |
5 /25 /100 |
978/3186/8726 |
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36407ES08/25/60 |
5 /25 /100 |
2488/9988/16488 |
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36408ES08/25/60 |
5 /25 /100 |
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36409ES03/08 |
1 mL/5×1 mL |
528/2218 |
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36410ES08/25 |
5 mL/5×5 mL |
1848/6838 |
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36413ES03/08 |
1 mL/5×1 mL |
528/2218 |
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36414ES08/25 |
5 mL/5×5 mL |
1848/6838 |
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36415ES03/08 |
1 mL/5×1 mL |
938/3748 |
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36416ES08/25 |
5 mL/5×5 mL |
3528/14088 |
文献引用
[1] Wang X , Yu C , Wang C , et al. Novel cyclin-dependent kinase 9 (CDK9) inhibitor with suppression of cancer stemness activity against non-small-cell lung cancer[J]. European Journal of Medicinal Chemistry, 2019, 181. IF: 5.201
[2] Zheng L, Xiang C, Li X, et al. STARD13-correlated ceRNA network-directed inhibition on YAP/TAZ activity suppresses stemness of breast cancer via co-regulating Hippo and Rho-GTPase/F-actin signaling[J]. Journal of hematology & oncology, 2018, 11(1): 72. IF：7.33
[3] Gao L, Guo Q, Li X, et al. MiR-873/PD-L1 axis regulates the stemness of breast cancer cells[J]. EBioMedicine, 2019, 41: 395-407. IF：6.68
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