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产品简介
Ni-TED Agarose Resin 6FF以高度交联的6%琼脂糖凝胶为基质，通过化学方法偶联三（羧甲基）乙二胺（TED）为配体，螯合镍离子（Ni2+）而制备成的一种介质。Ni-TED Agarose Resin 6FF与Ni2+具有5个螯合位点，使得其对于 Ni2+具有很强的约束力，这一特性赋予了本品具有优异的 DTT以及 EDTA 耐受性，特别适用于纯化真核细胞培养上清液中的His标签蛋白。本品用于带有 His 标签的蛋白纯化时拥有稳定性高、复杂环境中一步纯化蛋白、目标蛋白质吸附量大（但会低于Ni-NTA）、蛋白洗脱条件温和、介质易再生、重复利用率高等优点。
Ni-TED 6FF Chromatography Column是一种以Ni-TED Agarose Resin 6FF为填料的中压预装柱，规格5 mL, 该预装柱具有标准接口，可以适配商品化的各类中压色谱系统，如ÄKTA等，方便客户操作。
产品信息
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货号 |
20498ES08 / 20498ES25 |
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规格 |
5 mL /5×5 mL |
产品性质
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基质（Matrix） |
高度交联的6%琼脂糖凝胶 |
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粒径（Bead size） |
45-165 µm |
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载量（Capacity） |
＞15 mg His-tagged protein（27.5 kDa）/mL 基质 |
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耐压（Tolerance Pressuremax） |
0.3 MPa, 3 bar |
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储存缓冲液（Storage Buffer） |
20%乙醇 |
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pH稳定性 |
4-10（工作）；2-14（CIP） |
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化学稳定性 |
24 h耐受10 mM EDTA，5 mM DTT， 5 mM TCEP，20 mM β-巯基乙醇，1 M NaOH，6 M 盐酸胍 ；2 h耐受500 mM咪唑，100 mM EDTA |
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柱子尺寸（Column Size） |
1.6×2.5 cm（5 mL） |
储存条件
2~8℃保存，有效期4年。
使用说明
- 纯化流程
- 缓冲液的准备
缓冲液使用原理：低咪唑上样，高咪唑洗脱。Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤除菌。
平衡缓冲液：20 mM PBS，0.5 M NaCl，pH 7.4
洗杂缓冲液：20 mM PBS，0.5 M NaCl，0-30 mM 咪唑，pH 7.4
洗脱缓冲液：20 mM PBS，0.5 M NaCl，50-500 mM 咪唑，pH 7.4
- 样品准备
在上样前将宿主细胞碎片通过离心等方式去除，7000 rpm离心15 min，收集上清。然后过 0.45 um 的微孔滤膜。为了获得最大的载量，不要在样品蛋白溶液中添加咪唑。
- 样品纯化（以AKTA使用为例）
a）将泵管道注满去离子水。将预装柱顶端堵头卸掉，连接到层析设备入口，然后将底端堵头打开，连接到层析设备。
b）3-5倍柱体积去离子水冲洗出存储缓冲液。
c）至少5倍柱体积的平衡缓冲液平衡色谱柱。推荐流速为1-5 mL/min。
d）利用泵或注射器上样。【注】若样品粘度增加，即使上样体积很少也会导致层析柱很大的反压；上样量不要超过柱子的结合能力；大量的样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。
e）洗杂缓冲液冲洗柱子，直到紫外吸收达到一个稳定的基线（一般至少10-15个柱体积）。
【注】在样品和结合缓冲液中加入低浓度咪唑可以提高样品纯度。
f）洗脱缓冲液一步法或梯度法进行洗脱。一步法洗脱中一般5倍柱体积洗脱液即可。梯度洗脱可以用一个小的梯度，例如20倍柱体积或更多来分离不同结合强度的蛋白质。
g）随后依次用2倍柱体积的1 mol/L NaOH和5倍柱体积的去离子水清洗填料。5倍柱体积的20%乙醇平衡填料，最后将填料保存在20%乙醇的1×PBS中，置于4℃保存。
- SDS-PAGE检测
将纯化过程中得到的样品（包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等）利用SDS-PAGE进行检测，判定其纯化效果。
- 在位清洗
当填料使用过程中发现反压过高（＞0.5 Mpa）或者填料上面出现明显的污染时，需对其进行在位清洗（Cleaning-in-Place，CIP）。建议按照下面操作去除填料上残留的污染物，如沉淀蛋白、疏水蛋白和脂蛋白等。
- 去除强疏水结合的蛋白，脂蛋白和脂类
使用30%异丙醇清洗5-10个柱体积，接触时间为15-20 min可以去除此类污染物。之后再用去离子水清洗10倍柱体积。也可以选择使用含有去污剂的酸性或者碱性溶液清洗填料2倍柱体积。例如含有0.1-0.5%非离子去污剂的0.1 M醋酸溶液，接触时间为1-2 h。去污剂处理后，需用70%的乙醇清洗5倍柱体积，彻底去除去污剂。最后利用去离子水清洗10倍柱体积。
2) 去除离子作用结合的蛋白
使用1.5 M NaCl 溶液接触10-15 min，之后用去离子水清洗10倍柱体积。
清洗好的柱子可再用20%乙醇冲洗2个柱体积，最后将填料保存在20%乙醇的1×PBS中，置于4℃保存。
注意事项
1. 本产品仅作科研用途。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
Ver.CN20240606
