抗体纯化伴侣的选择-配基篇

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2022-05-06

在细菌表面可分泌表达特殊功能蛋白与免疫球蛋白特异结合，主要分为Protein A金黄色葡萄球菌蛋白 A（Staphylococcal proteinA, SPA）、Protein G链球菌G群的细胞表面蛋白 G（Streptococcal protein G, SPG）和Protein L大消化链球菌蛋白 L（Peptostreptococcus protein L, PPL），均为典型的免疫球蛋白结合蛋白。可结合大多数哺乳动物的免疫球蛋白，其结合方式和结合谱有所差异，三种蛋白可以优势互补，灵活应用。

新产品借助天然蛋白结构域分析，特异设计与之对应的重组蛋白产品，具有高纯度，低内毒素以及无外源引入IgG等特点，使之在免疫学相关研究与生产中发挥巨大作用。

图1. Yeasen 的Protein系列重组蛋白

作为应用较为广泛的亲和配基使用，研究工作者分别解析其区域结合域，具体如下：

图2. SPA蛋白结构示意图

图3. SPG蛋白结构示意图

图4. PPL蛋白结构示意图

重组蛋白Protein A由大肠杆菌表达体系获得，功能与SPA 基本相同，由5个 IgG 结合结构域 E-D-A-B-C 串联排列组成，对 IgG 的 Fc 片段具有很强的特异性亲和力。重组蛋白Protein A 作为亲和配基被偶联到基质上，可以特异性的和样品中的抗体分子结合，而使其他杂蛋白流穿，具有极高的选择性。

重组蛋白Protein G从大肠杆菌表达体系中获得，含有SPG 的 3 个 IgG 结合区。为确保 IgG 的最大特异性结合，重组蛋白Protein G 中细胞壁结合区、细胞膜结合区和白蛋白结合区已被去除，减少了交叉反应和非特异性结合。重组蛋白Protein G 被广泛与树脂偶联的配体，用作纯化多克隆或单克隆 IgG 抗体。

重组蛋白Protein L 类似于PPL包含 5 个 kappa 结合结构域。具有独特的通过 kappa 轻链相互作用结合而不干扰抗体-抗原结合位点。重组蛋白 Protein L 中去除了细胞壁结合区、细胞膜结合区和白蛋白结合区，以确保最大程度 IgG 的特异性结合。

重组蛋白Protein A/G在大肠杆菌中产生，由 7 个 IgG 结合结构域 EDABC-C1C3 组成，对应于 5 个Protein A 的 IgG 结合区和 2 个Protein G 的 IgG 结构域。重组蛋白Protein A/G 的结合能力比单独的蛋白 A 或蛋白 G 更广。

产品应用

1. 作为纯化配基，亲和层析介质制备原料；

2. 作为抗原，应用于生产高质量抗体；

3. ELISA和其他分析方法中作为标准品使用；

4. 免疫沉淀与免疫共沉淀应用。

表1. Protein A、G 和 L 对不同物种 Ig 的结合能力总表

产品特点

1. 低内毒素：经LAL法检测，均< 0.1EU/μg。

2. 高纯度：均>96%，经SDS-PAGE和HPLC双重检测。

3. 产品形态：冻干粉，相比于液体，冻干粉产品稳定性更好，更易长时间储存。

4. Carrier Free：不含载运蛋白。

5. 现货供应，多种规格可选。

产品质检数据

图5. Protein A蛋白质控数据

重组蛋白Protein A 经 SDS-PAGE 和 HPLC 双重检测，纯度>97%

图6. Protein G蛋白质控数据

重组蛋白Protein G 经 SDS-PAGE 和 HPLC 双重检测，纯度>96%

图7. Protein L蛋白质控数据

重组蛋白Protein L 经 SDS-PAGE 和 HPLC 双重检测，纯度>97%

图8. Protein A/G蛋白质控数据

重组蛋白Protein A/G 经 SDS-PAGE 和 HPLC 双重检测，纯度>97%

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