Streptactin Agarose Resin 4FF(Strep(Ⅱ)标签蛋白琼脂糖纯化树脂)

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产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

 

Strep-Tag II8个氨基酸的小标签(WSHPQFEK),由于标签小,仅为1.06 kDa左右,不影响融合后蛋白质的结构和功能,因此无需去除该标签其特异性高,单步纯化纯度高,纯化条件温和,蛋白两端均可融合等突出特点迅速得到了广泛应用。Twin Strep-tag II是一个顺序排列的两个Strep-tag II序列(通过内部氨基酸连接),该标签能够像Strep-tag II一样进行温和、快速的纯化。

Streptactin 是最稳定的蛋白之一,其偶联至高度交联的 4%琼脂糖微球上,可用于各种表达系统,包括杆状病毒、哺乳动物细胞、酵母和细菌中含有Strep-Tag II标签蛋白纯化,同时该树脂也可用于 Twin Strep-Tag II 标签纯化。

 

产品性质

基质

高度交联的4%琼脂糖微球

配体

Streptactin

粒径

45-165 µm

载量

3-5 mg Twin Strep-tag II蛋白/mL 介质

最大流速

300cm/h

储存缓冲液

20%乙醇的1×PBS

 

运输和保存方法

冰袋运输。2~8℃保存,有效期2年。

 

注意事项

1.了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

2.产品仅作科研用途!

 

使用方法

1 缓冲液的准备

所用水和缓冲液在使用之前建议用 0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜过滤。

平衡/洗杂液: 100 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, pH 8.0

         PBS50 mM sodium phosphate,280 mM NaCl, 6 mM potassium chloride, pH7.4

洗脱液: 平衡/洗杂液中添加2.5 mM脱硫生物素或D-生物素混匀即可。

再生液1 M NaOH或平衡液中加入1 mM HABA 

注:D-生物素与Streptactin结合紧密,高浓度氢氧化钠清洗后载量只能达到初始载量的50%左右。

2 样品准备

样品上样前建议用 0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜过滤,防止堵塞柱子

3样品纯化

3.1重力柱纯化

3.1.1装柱

1)取一支空柱,将下垫片压制柱底部并压实,用去离子水冲洗垫片,待水从下出口流出后马上关闭下出口。

2)将树脂悬浮起来,用枪取适量浆液加入柱中(保存液与填料比是 11),打开下出口流干保护液。

3)加入适量去离子水润洗柱料,待柱料流干后关闭下出口。

4)装入上垫片,确保垫片与柱料无空隙,注意不可用力要垫片,防止损坏柱料。

3.1.2 平衡5倍柱体积的平衡/洗杂液进行平衡,使填料处于与目的蛋白相同缓冲体系下。

3.1.3 上样:将样品加入平衡好的柱子中,样品保留至少2min,保证样品和介质充分接触,可以多次上样增加结合效率。

【注】注意收集流出液,用于后续SDS-PAGE检测蛋白的结合情况。 

3.1. 4 平衡/洗杂10倍柱体积的平衡/洗杂液进行洗杂,去除非特异性结合的杂蛋白,收集洗杂液。

3.1. 5 洗脱再用5倍柱体积的洗脱液进行洗脱目的蛋白,分管收集

3.2中压层析柱纯化

3.2.1装柱

1用去离子水冲洗层析柱底筛板与接头,确保柱底筛板上无气泡,关闭柱底出口,并在柱底部留出 1~2 cm 的去离子水。

2将树脂悬浮起来,小心的将浆液连续地倒入层析柱中。用玻璃棒沿着柱壁倒入浆液可减少气泡的产生。 

3)打开层析柱底部出口,开启泵,使其在设定的流速下进行。最初应让缓冲液缓慢流过层析柱,然后缓慢增加至最终流

速,这样可避免液压对所形成柱床的冲击,也可以避免柱床形成的不均匀。如果达不到推荐的压力或流速,可以用你所使用

泵的最大流速,这样也可以得到一个很好的装填效果。当柱床高度稳定后,在最后的装柱流速下至少再上3倍柱床体积的去离子水,标上柱床高度。 

【注】在随后的色谱程序中,不要超过最大装柱流速的 75%

3.2.2 平衡使用至少 5 倍柱床体积的平衡/洗杂液平衡色谱柱。 

3.2.3 上样:利用泵或样品环上样。

注意:样品的粘度增加使得即使上样体积很少,也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的

样品体积也可能造成很大的反压,使得进样器更难使用。 

3.2. 4 平衡/洗杂平衡/洗杂液冲洗柱子,直到紫外吸收达到一个稳定的基线(一般至少 10~15 个柱体积)。 

3.2. 5 洗脱:使用 5~10 倍柱体积的洗脱液洗脱,收集洗脱液,即目的蛋白组分。

4 填料再生和清洗

4.1 再生

4.1.1 洗脱剂为脱硫生物素

15倍柱体积的去离子水清洗柱子

215倍柱体积的1 mM HABA的平衡液再生

330 倍柱体积平衡液清洗;

4.1.2 洗脱剂为D-生物素

15倍柱体积的去离子水清洗柱子

215倍柱体积的1 M NaOH再生

330 倍柱体积平衡液清洗;

4.2 保存

填料再生清洗后保存在等体积的保护液中,2~8保存。

附表1 Streptactin Agarose Resin 4FF试剂耐受情况

试剂种类

浓度

还原剂

50 mM DTT

50 mM β-mercaptoethanol

去污剂

2% TritonTM X-100(nonionic)

2% TweenTM20(nonionic)

0.1% CHAPS (zwitterionic)

其他类

2 M (NH4)2SO4

1 M CaCl2

                                                                                                       HB230215

400-6111-883