白细胞介素6(IL-6)最初被鉴定为B细胞分化因子,现在已知是一种多功能细胞因子,可调节免疫反应、造血、急性期反应和炎症,其有3个受体结合位点,包括1个特异性受体IL-6R 结合位点,和2个gp130结合位点。IL-6是一种多效性、α螺旋、22-28kDa的糖蛋白,在急性期反应、炎症、造血、骨代谢和癌症进展中发挥重要作用,人IL-6与小鼠和大鼠IL-6具有39%的aa序列同一性。它是一种多效性细胞因子,不仅影响免疫系统,还作用于其他生物系统和各种器官的许多生理事件,同时也能诱导骨髓瘤和浆细胞瘤的生长。
翌圣Mouse IL-6 ELISA(酶联免疫吸附测定)试剂盒是一种体外酶联免疫吸附测定试剂盒,用于定量测定血清、血浆中的小鼠白介素6(Mouse IL-6)。特异性抗小鼠白介素6抗体预包被在高亲和力的酶标板上。酶标板孔中加入标准品、待测样本,经过孵育,样本中存在的小鼠白介素6与固相抗体结合。洗涤去除未结合的物质后,加入检测抗体孵育结合,经洗涤,再加入酶结合物(Streptavidin-HRP)孵育结合。洗涤后,加入显色底物 TMB,避光显色。颜色反应的深浅与样本中小鼠白介素6的浓度成正比。加入终止液终止反应,在450 nm 波长(参考波长570 - 630 nm)测定吸光度值。
货号 |
98027ES48 / 98027ES96 |
规格 |
48 T / 96 T |
检测范围 |
15.63-1000 pg/mL |
检测方法 |
双抗夹心法 |
检测物种 |
小鼠 |
检测时长 |
4.5小时 |
灵敏度 |
9.37 pg/mL |
稀释线性 |
74 - 107% |
回收率 |
77 - 111% |
板内差 |
3.1% |
板间差 |
5.7% |
数据拟合绘制标准曲线,生成的标曲用于实验数据分析。
IL-6的最低检测限为9.37 pg/mL,通过使用重复检测20次零孔OD值的均值与标准差计算得出。
酶标板内精密度
3个已知浓度的样本酶标板内重复测定8次,评估酶标板内的精密度。
酶标板间精密度
3个已知浓度的样本酶标板间重复检测24次,评估酶标板间的精密度。
项目 |
板内精密度 |
板间精密度 |
||||
样本 |
1 |
2 |
3 |
1 |
2 |
3 |
8 |
8 |
8 |
24 |
24 |
24 |
|
平均值 |
614.01 |
165.44 |
39.27 |
622.44 |
161.44 |
42.01 |
标准差 |
16.25 |
5.85 |
1.29 |
24.60 |
6.54 |
3.82 |
变异系数(%) |
2.6 |
3.5 |
3.3 |
4.0 |
4.0 |
9.1 |
通过不同水平的IL-6添加于样本中来测定回收率,其回收率如下:
样本类型 |
平均回收率(%) |
范围(%) |
血清 |
94.4 |
85.5-108.6 |
血浆 |
96.3 |
81.6-111.1 |
细胞培养上清 |
90.2 |
77.5-102.2 |
血清稀释比例 |
平均期望值(%) |
范围(%) |
1:02 |
81.6 |
77.8-87.1 |
1:04 |
94.4 |
91.3-98.9 |
1:08 |
96.8 |
92.7-103.9 |
1:16 |
97.6 |
88.5-103.6 |
血浆稀释比例 |
平均期望值(%) |
范围(%) |
1:02 |
94.5 |
84.0-107.2 |
1:04 |
96.2 |
88.9-100.2 |
1:08 |
102.3 |
99.0-106.7 |
1:16 |
82.2 |
74.4-92.5 |
细胞培养上清稀释比例 |
平均期望值(%) |
范围(%) |
1:02 |
86.3 |
82.5-89.6 |
1:04 |
95.4 |
93.3-98.1 |
1:08 |
97.7 |
91.7-102.7 |
1:16 |
97.2 |
96.0-99.4 |
应用本试剂盒,检测若干健康志愿者的样本,志愿者的用药史不详。
样本类型 |
样本数目 |
平均值(pg/mL) |
样本值(pg/mL) |
血清 |
10 |
n.d. |
n.d. |
血浆 |
8 |
33.6 |
n.d.-59.0 |
细胞培养上清 |
4 |
n.d. |
n.d. |
n.d. 指样本浓度值低于检测范围内得15.63 pg/mL
本试剂盒识别天然和重组小鼠白介素6。下述因子进行了特异性的评估,没有观察到明显的交叉反应和干扰影响。
Recombinant human: |
Recombinant Mouse: |
||
IL-1α |
IL-8 |
IL-1α |
IL-10 |
IL-1β |
IL-10 |
IL-1β |
IL-12 |
IL-2 |
IL-12 |
IL-2 |
IFN-γ |
IL-4 |
IFN-γ |
IL-4 |
VEGF |
IL-5 |
VEGF |
IL-5 |
TNF-α |
IL-6 |
TNF-α |
|
|
问题 |
造成原因 |
解决方法 |
标曲不好 |
移液量不准确 |
检查移液器,按时校准,仔细操作,充分混匀时盖紧管口并尽量避免泡沫。 |
稀释方法不恰当 |
||
显色值偏低 |
孵育时间太短 |
给予足够的孵育时间,样本和溶解的标准品隔夜后更换。 |
移液量不足或稀释不当 |
校准移液器和规范操作 |
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CV偏高 |
酶标板清洗不当 |
使用正确的洗涤工序;如果使用洗板机,检查所有的端口是否堵塞。 |
受污染的洗液 |
准备新鲜洗液 |
|
灵敏度较低 |
试剂盒储存不当 |
按照产品组分表进行保存。 |