MMP-9(又称明胶酶B，92 kDa IV型胶原酶，92 kDa明胶酶，V型胶原酶) 是一种糖化前酶。酶的活化涉及到脱N端PRO区的蛋白水解，产生82 kDa的活性酶。活性人MMP-9与小鼠和大鼠MMP-9的氨基酸序列同源性分别为72%和74%。除锌结合位点外，催化结构域还包含三个连续的纤维连接蛋白II型同源性单元，负责结合明胶。一个富含脯氨酸的铰链区将催化结构域连接到C-端血红素样结构域。用4-氨基苯基乙酸汞(APMA) 体外处理前酶，不仅产生活性酶，而且产生C末端截短形式，其活性与活性形式相当。MMP-9降解ECM中对变性胶原(明胶)具有高比活性的成分。它能切割III型、IV型、V型和XI 型的天然胶原，以及弹性蛋白、尼达根-1和维托菌素。MMP-9还能切割多种趋化因子和生长因子(如IL-1β、 CXCL 8/IL-8、CXCL 7、CXCL 4、CXCL 1、潜伏型转化生长因子-β、膜结合肿瘤坏死因子-α、血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子)、淀粉样α肽、P物质和髓鞘碱性蛋白。这种作用可以增加或降低可溶性因子的生物活性，也可以使它们脱离与ECM的联系。MMP-9还可通过多种跨膜蛋白触发信号传递，或通过诱导其从细胞表面脱落(如CD44、E-钙粘附素、整合素、ICAM-1和IL-2 Rα)而抑制信号传递。

翌圣Human MMP-9 ELISA(酶联免疫吸附测定)试剂盒是一种体外酶联免疫吸附测定试剂盒，用于定量测定血清、血浆、细胞培养上清中的人基质金属蛋白酶9(Human MMP-9)。特异性抗人基质金属蛋白酶9抗体预包被在高亲和力的酶标板上。酶标板孔中加入标准品、待测样本，经过孵育，样本中存在的人基质金属蛋白酶9与固相抗体结合。洗涤去除未结合的物质后，加入检测抗体孵育结合，经洗涤，再加入酶结合物(Streptavidin-HRP)孵育结合。洗涤后，加入显色底物 TMB，避光显色。颜色反应的深浅与样本中人基质金属蛋白酶9的浓度成正比。加入终止液终止反应，在450 nm 波长(参考波长570 - 630 nm)测定吸光度值。

 

产品信息

货号	97037ES48 / 97037ES96
规格	48 T / 96 T
检测范围	31.25-2000 pg/mL
检测方法	双抗夹心法
检测物种	人
检测时长	5小时
灵敏度	7.44 pg/mL
稀释线性	76.7 -105.9 %
回收率	76.1 - 119.2 %
板内差	4.6 %
板间差	5.1 %

 

实验数据

1. 标曲数据

2.灵敏度检测

人基质金属蛋白酶9的最低检测限为7.44 pg/mL，通过使用重复检测20次零孔OD值的均值与标准差计算得出。

3.精密度检测

酶标板内精密度

3个已知浓度的样本酶标板内重复测定20次，评估酶标板内的精密度。

酶标板间精密度

3个已知浓度的样本酶标板间重复检测36次，评估酶标板间的精密度。

项目	板内精密度			板间精密度
样本	1	2	3	1	2	3
	20	20	20	36	36	36
平均值	61.3	234.7	966.3	59.9	235.9	979.6
标准差	4.09	6.91	39.87	5.06	7.71	35.61
变异系数（%）	6.7	2.9	4.1	8.4	3.3	3.6

4.回收率检测

  通过不同水平的人基质金属蛋白酶9添加于样本中来测定回收率，其回收率如下:

样本类型	平均回收率(%)	范围（%）
血清	101.8	90.9-109.3
血浆	97.2	85.0-105.0
细胞培养上清	94.1	76.1-119.2

5.稀释线性检测

血清稀释比例	平均期望值(%)	范围（%）
1:02	99.7	96.3-105.9
1:04	96.1	93.1-102.0
1:08	92.7	85.1-98.8
1:16	90.5	85.7-93.5

 

血浆稀释比例	平均期望值(%)	范围（%）
1:02	100.7	98.2-102.1
1:04	99.7	97.7-101.5
1:08	99.5	97.5-101.7
1:16	101.0	99.4-102.2

 

细胞培养上清稀释比例	平均期望值(%)	范围（%）
1:02	95.5	84.2-101.6
1:04	93.9	84.2-103.0
1:08	94.6	83.1-104.6
1:16	88.3	76.7-95.6

6.样本值

应用本试剂盒，检测若干健康志愿者的样本，志愿者的用药史不详。

样本类型	样本数目	平均值（pg/mL）	样本值（pg/mL）
血清	10	468.2	49.0-1148.0
肝素血浆	10	511.4	4.0-1101.8
EDTA血浆	10	420.5	38.4-922.3
枸橼酸钠血浆	10	974.6	73.6-4302.8
细胞培养上清	10	n.d.	n.d.

n.d. 指样本浓度值低于检测范围内的31.25 pg/mL。

7.测定特异性

本试剂盒识别天然和重组人基质金属蛋白酶9。下述因子进行了特异性的评估，没有观察到明显的交叉反应和干扰影响。

Recombinant human:		Recombinant mouse:
ADAM8	MMP-8	ADAM9
ADAM10	MMP-10	ADAM10
ADAM15	MMP-12 (catalytic domain)	ADAM15
Lipocalin-2/NGAL	MMP-13	Lipocalin-2/NGAL
MMP-1	TACE (ADAM17)	MMP-2
MMP-2	TIMP-2	MMP-3
MMP-3	TIMP-3	MMP-9
MMP-7	TIMP-4	TIMP-1